軟骨損傷是一種臨床常見(jiàn)病,包括磨損與老年后發(fā)生的退行性病變,由于軟骨內(nèi)缺乏血管、神經(jīng)等組織,導(dǎo)致軟骨一旦損傷,則很難修復(fù)。ATDC5是一種重要的軟骨細(xì)胞模型,已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于軟骨細(xì)胞增殖分化等方面的研究,但關(guān)于ATDC5細(xì)胞在各增殖與分化階段標(biāo)志物如何變化方面的研究較少。因此,為了闡明ATDC5細(xì)胞系是否具有與軟骨細(xì)胞相似的靜息期、增殖期、肥大期和鈣化期的分期特性,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)不同培養(yǎng)天數(shù)ATDC5細(xì)胞標(biāo)志物的檢測(cè),確定軟骨細(xì)胞分化各階段相關(guān)標(biāo)志性基因與蛋白差異表達(dá)情況,明確該細(xì)胞系的增殖分化階段劃分。確定ATDC5細(xì)胞是否可以模擬軟骨細(xì)胞某一時(shí)期的增殖分化過(guò)程,為進(jìn)一步采用ATDC5細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究提供一個(gè)參考依據(jù)。以ATDC5細(xì)胞作為軟骨細(xì)胞的體外模型,接種于FBS濃度為5%的DMEM/F12（1:1）的細(xì)胞瓶?jī)?nèi),待細(xì)胞長(zhǎng)至50%后,加入1%ITS誘導(dǎo)分化,離體培養(yǎng)21天（d）,分別在4 d、7 d、14 d、21 d四個(gè)時(shí)間點(diǎn),檢測(cè)軟骨細(xì)胞增殖分化階段的標(biāo)志性因子的表達(dá)情況。從細(xì)胞水平,明確ATDC5細(xì)胞的細(xì)胞增殖、活性及形態(tài)學(xué)變化;對(duì)ATDC5細(xì)胞進(jìn)行阿利新蘭及茜素紅-S... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ALP檢測(cè)路線圖及相關(guān)試劑的配備

圖 3-2A RNA 完整性檢測(cè)結(jié)果及 DNA 驗(yàn)證結(jié)果ure 3-2A RNA integrity test results and DNA verification results及蛋白多糖生成的趨勢(shì)體外培養(yǎng)的環(huán)境下，在保持軟骨細(xì)胞分化特性的前提下迅速

注：箭頭所指向軟骨結(jié)節(jié)，圓圈向鈣化斑。Note: Arrowhead refers to a cartilaginous nodule, circle refers to a cartilaginous knot.圖 3-3 相差顯微鏡下觀察的 ATDC5 細(xì)胞培養(yǎng) 4 d、7 d、14 d 和 21 d 的增殖分化狀態(tài)Figure 3-3 Proliferation and differentiation status of ATDC5 cells cultured for 4 day, 7 day, 14 dayand 21 day under phase contrast microscope3.4 ALP 活性的檢測(cè)ALP 活性可以作為軟骨細(xì)胞發(fā)生礦化的標(biāo)記，軟骨細(xì)胞中 ALP 活性的誘導(dǎo)與發(fā)生礦化的肥大軟骨細(xì)胞中基質(zhì)小泡的分化和積累有關(guān)。為了檢測(cè) ATDC5 細(xì)胞的礦化程度，使用 PNPP檢測(cè)法對(duì) ALP 活性進(jìn)行檢測(cè)，如圖 3-5 所示，細(xì)胞培養(yǎng)至 7 d，ALP 活性無(wú)明顯變化（P>0.05），繼續(xù)培養(yǎng)至 14 d，ALP 活性顯著上升（P<0.001），直至 21 d 雖有下降趨勢(shì)，但差異不顯著。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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