為了獲得具有生物學(xué)活性的非洲豬瘟病毒（ASFV）MGF505-5R蛋白及其特異性多克隆抗體,分別將His-SUMO、His-TrxA、His-GST、His-MBP和His-NusA基因片段與MGF505-5R基因連接,構(gòu)建原核表達(dá)載體pET28a-SUMO-MGF505-5R、pET28a-TrxA-MGF505-5R、pET28a-GST-MGF505-5R、pET28a-MBP-MGF505-5R和pET28a-NusA-MGF505-5R,并分別轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá);通過對(duì)誘導(dǎo)劑濃度、誘導(dǎo)溫度和誘導(dǎo)時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化,研究最佳表達(dá)條件;采用麥芽糖親和層析和Ni²⁺親和層析對(duì)表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行純化,并將純化后的重組蛋白免疫BALB/c小鼠制備多克隆抗體;應(yīng)用Western blot方法對(duì)制備的多克隆抗體進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示,MBP-MGF505-5R重組蛋白能夠在大腸桿菌中可溶性表達(dá),在20℃條件下,IPTG濃度為0.5 mmol/L、誘導(dǎo)12 h時(shí),重組蛋白可溶性表達(dá)量最高;純化后可獲得純度達(dá)90%以上的MGF505-5R蛋白。... 

【文章來(lái)源】：河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,49(10)北大核心

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MGF505-5R基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果

5種融合標(biāo)簽基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

對(duì)MBP-MGF505-5R重組蛋白的表達(dá)條件進(jìn)行了優(yōu)化,即在20 ℃條件下,設(shè)置IPTG濃度梯度:0.2、0.5、0.8 mmol/L,分別誘導(dǎo)8 h和12 h取樣檢測(cè)分析MBP-MGF505-5R重組蛋白可溶性表達(dá)水平。從圖4可以看出,當(dāng)IPTG濃度為0.5 mmol/L時(shí),MBP-MGF505-5R重組蛋白可溶性表達(dá)量最高,但是進(jìn)一步增加誘導(dǎo)劑濃度到0.8 mmol/L時(shí),MBP-MGF505-5R重組蛋白可溶性表達(dá)水平下降,說明最適誘導(dǎo)劑濃度為0.5 mmol/L。在IPTG濃度為0.5 mmol/L的誘導(dǎo)條件下,誘導(dǎo)時(shí)間增加,MBP-MGF505-5R重組蛋白的可溶性表達(dá)量提高。圖4 MBP-MGF505-5R重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬傳染性胃腸炎病毒膜蛋白親和肽的原核表達(dá)及其病毒親和性分析[J]. 于天飛,董慧瑩,謝鵬宇,孫婉姝,尹海暢,黎明,于志丹.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2019(05)
[2]非洲豬瘟病毒基因缺失疫苗株的構(gòu)建和免疫保護(hù)特性[J]. 張艷艷,陳騰,張靜遠(yuǎn),齊宇,繆發(fā)明,薄宗義,王立冬,郭曉宇,周鑫韜,楊金梅,王曉虎,高玉龍,汪春雨,鮑晨沂,米立娟,孫雪霏,馮娜,楊金金,王承宇,萬(wàn)忠海,李記平,孟軻音,田多,李楠,王述超,王穎,張菲,張錦霞,蔣依倩,劉曄,張守峰,張中洋,錢鶯娟,朱鴻飛,高玉偉,陳鴻軍,李金祥,扈榮良.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2019(08)
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碩士論文
[1]非洲豬瘟病毒免疫抑制基因的篩選及RPA檢測(cè)方法的初步建立[D]. 吳映彤.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2019



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