本論文驗(yàn)證豬肌肉特異性基因CAPN3肝臟特異性基因TTR啟動(dòng)子的活性。采用豬肌肉特異性基因myf6的啟動(dòng)子與MyoD基因的CDS序列,構(gòu)建在豬肌肉特異性高效表達(dá)MyoD的重組體；采用豬肝臟特異性基因TTR的啟動(dòng)子與BGL1基因的CDS序列,構(gòu)建在豬肝臟特異性高效表達(dá)BGLl的重組體,之后通過顯微注射制作轉(zhuǎn)基因小鼠,為培育高產(chǎn)低耗轉(zhuǎn)基因豬建立轉(zhuǎn)基因模型。目前取得的主要研究成果：1)肌肉組織特異性表達(dá)基因CAPN3啟動(dòng)子的活性分析。在GeneBank數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選在豬肌肉組織特異性表達(dá)基因CAPN3及其DNA序列,取其翻譯起始位點(diǎn)ATG上游2300bp為啟動(dòng)子序列作為研究對(duì)象,運(yùn)用NNPP、 DNAman、ConSit進(jìn)行序列的核心啟動(dòng)子區(qū)域、不同物種同源性、同源性最高的區(qū)域轉(zhuǎn)錄結(jié)合因子進(jìn)行預(yù)測(cè)分析；據(jù)此,構(gòu)建了8個(gè)缺失片段的熒光表達(dá)載體,分別轉(zhuǎn)染C2C12、3T3、Hepal-6細(xì)胞,確定第3個(gè)缺失片段P3（-705-0）活性最高,并且具有較強(qiáng)的組織特異性。2)肝臟特異性表達(dá)基因TTR啟動(dòng)子的活性分析。在GeneBank數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選在豬肝臟特異性表達(dá)基因TTR,以翻譯起始位點(diǎn)ATG上游25... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮寫對(duì)照表
第一章 動(dòng)物轉(zhuǎn)基因研究進(jìn)展
    1 前言
    2 動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展概況
    3 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備方法
        3.1 原核顯微注射法
        3.2 逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法
        3.3 胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)法
        3.4 精子載體法
        3.5 體細(xì)胞核移植法
        3.6 性腺注射轉(zhuǎn)基因法
        3.7 RNA干涉法
        3.8 基因打靶結(jié)合克隆法
    4 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的鑒定
        4.1 轉(zhuǎn)基因整合檢測(cè)
        4.2 轉(zhuǎn)基因表達(dá)檢測(cè)
    5 轉(zhuǎn)基因技術(shù)在畜牧生產(chǎn)方面的應(yīng)用
        5.1 提高生產(chǎn)性能
        5.2 抗逆新品種(系)的培育
    6 轉(zhuǎn)基因技術(shù)對(duì)畜牧生產(chǎn)領(lǐng)域的發(fā)展前景
    7 目的與意義
第二章 肌肉和肝臟組織特異性啟動(dòng)子活性分析
    1 前言
    2 試驗(yàn)材料
        2.1 主要的儀器設(shè)備
        2.2 主要試劑和藥品
        2.3 主要試劑的配制
        2.4 主要生物學(xué)軟件
        2.5 載體和菌種
    3 試驗(yàn)方法和步驟
        3.1 豬CAPN3基因和TTR基因啟動(dòng)子的PCR擴(kuò)增
        3.2 熒光檢測(cè)載體制備及酶切鑒定
        3.3 啟動(dòng)子活性測(cè)定
    4 結(jié)果與分析
        4.1 豬CAPN3啟動(dòng)子的克隆及功能分析
        4.2 轉(zhuǎn)染細(xì)胞熒光活性的檢測(cè)
        4.3 豬TTR啟動(dòng)子的克隆及功能分析
        4.4 轉(zhuǎn)染細(xì)胞雙熒光素酶活性的檢測(cè)
    5 討論
第三章 肌肉和肝臟特異性表達(dá)外源基因載體的構(gòu)建
    1 前言
    2 試驗(yàn)材料
        2.1 主要儀器設(shè)備
        2.2 試驗(yàn)試劑與試劑盒
        2.3 主要溶液配方
        2.4 菌種和質(zhì)粒
    3 試驗(yàn)方法
        3.1 中間載體pMyoDEGFP-N1的構(gòu)建與鑒定
        3.2 肌肉特異性表達(dá)載體pSV40-myf6-MyoDEGFP-N1的構(gòu)建與鑒定
        3.3 中間載體pGL-BGLhis-control的構(gòu)建與鑒定
        3.4 肝臟特異性表達(dá)載體pTTRs-BGLhis-control的構(gòu)建與鑒定
        3.5 細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.6 RT-PCR檢測(cè)外源基因的轉(zhuǎn)錄
    4 結(jié)果與分析
        4.1 中間載體pMyoDEGFP-N1的構(gòu)建與鑒定
        4.2 肌肉特異性表達(dá)載體pSV40-myf6-MyoDEGFP-N1的構(gòu)建與鑒定
        4.3 中間載體pBGLhis-control的構(gòu)建與鑒定
        4.4 肝臟特異性表達(dá)載體pTTRs-BGLhis-control的構(gòu)建與鑒定
        4.5 pSV40-myf6-MyoDEGFP-N1載體轉(zhuǎn)染C2C12 mRNA水平的檢測(cè)
        4.6 pTTRs-BGLhis-control載體轉(zhuǎn)染Hepal-6 mRNA水平檢測(cè)
    5 討論
第四章 肌肉特異表達(dá)外源基因轉(zhuǎn)基因小鼠的制備與鑒定
    1 前言
    2 試驗(yàn)材料
        2.1 主要儀器設(shè)備
        2.2 試驗(yàn)試劑與試劑盒
        2.3 試驗(yàn)動(dòng)物
    3 試驗(yàn)方法
        3.1 顯微注射用DNA片段的制備及純化
        3.2 轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定
    4 試驗(yàn)結(jié)果
        4.1 顯微注射用DNA片段的制備及純化
        4.2 陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因小鼠的獲得
        4.3 轉(zhuǎn)基因小鼠PCR檢測(cè)
    5 討論
第五章 結(jié)論
    1 本研究獲得的結(jié)果
    2 下一步的研究?jī)?nèi)容
參考文獻(xiàn)
附錄1：pSV40-myf6-MyoDEGFP-N1載體的序列
附錄2：pTTRs-BGLhis-control載體的序列
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3487019