睪丸支持細(xì)胞（sertoli cells,SCs）的緊密連接蛋白（claudins,CLDNs）在精子遷移過程中扮演著開關(guān)的角色。為探索CLDNs對牦牛（Bos grunniens）SC的生物學(xué)作用,本研究獲取牦牛CLDN3基因序列,對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析,并檢測FSH對SCs CLDN3、CLDN11表達(dá)的影響。擴(kuò)增CLDN3基因序列,測序并拼接,用生物信息軟件分析牦牛CLDN3 m RNA特征。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real time polymerase chain reaction,q RT-PCR）檢測FSH對牦牛SCs CLDN3 m RNA、CLDN11 m RNA表達(dá)的影響。通過免疫蛋白印記（Western bloting,WB）方法,檢測FSH對牦牛SCs CLDN3蛋白、CLDN11蛋白表達(dá)的影響,并采用免疫熒光染色對CLDN3蛋白、CLDN11蛋白進(jìn)行定位檢測。結(jié)果表明:（1）本研究成功克隆得到1074 bp含有開放閱讀框的牦牛CLDN3 c DNA序列（Gen Bank No.YK 411920）,其中編碼區(qū)660 bp,編碼219氨... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

牦牛睪丸睪丸支持細(xì)胞的鑒定Figure1ThesertolicellsidentificationofyakA.倒置顯微鏡觀察(200×)

甘肅農(nóng)業(yè)甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)性氨基酸占 53.2%，帶電荷氨基酸占 11的堿性氨基酸。不穩(wěn)定系數(shù) 33.89，屬穩(wěn)性蛋白。與其他部分物種 CLDN3 氨基的氨基酸序列完全相同，和其他物種氨90%)，通過 Neighbor-Joining（NJ）法構(gòu)發(fā)現(xiàn)，牦牛同偶蹄目動(dòng)物為一支，肉食一個(gè)小分支。

圖 3 不同物種間 CLDN3 的親緣關(guān)系Figure 3 Phylogenetic relationship of CLDN3 fromdifferent species.本研究中牦牛 CLDN3 以▲表示；標(biāo)尺：表示兩個(gè)序列之間差異 1%The newly identified yak CLDN3 fromthe present study are indicated with ▲; 1%differences between two sequences3 討論目前 CLDN3 的研究主要集中于腎臟、腸、肝臟和皮膚[110]，對究甚少。本次研究使用體外培養(yǎng)成年健康牦牛 SCs，初步研究 CLDN牛精子生成中的作用。本研究成功克隆出牦牛 CLDN3 基因序列，本隆得到牦牛 CLDN3 基因序列(GenBank No. KY419920)，其全長含1074 bp，編碼區(qū) 660 bp，編碼 219 氨基酸， CLDN3 氨基酸序列比對

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]二花臉FSH的高量表達(dá)對大白公豬睪丸的影響[J]. 徐盼,李完波,蔣凱,楊強(qiáng),李龍?jiān)?喬傳民,龔煥發(fā),任軍,幸宇云.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2016(12)
[2]牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8基因的克隆及其在乳腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 李月琴,潘陽陽,田奎麗,趙天,張譯夫,樊江峰,崔燕,余四九.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2017(01)
[3]EGF、EGFR在牦牛卵母細(xì)胞中的表達(dá)及對胚胎發(fā)育能力的作用[J]. 潘陽陽,李秦,崔燕,樊江峰,楊琨,何俊峰,余四九.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(12)
[4]FSH對體外培養(yǎng)仔豬睪丸支持細(xì)胞周期的影響[J]. 孫思,張會(huì)瓊,王怡,張姣姣,王鮮忠,張家驊.  中國畜牧雜志. 2014(05)
[5]FSH對體外培養(yǎng)仔豬睪丸支持細(xì)胞cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA表達(dá)的影響[J]. 張姣姣,王怡,張會(huì)瓊,孫思,孫燕,王鮮忠,張家驊.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(06)
[6]Claudins整合膜蛋白研究進(jìn)展[J]. 呂健.  醫(yī)學(xué)綜述. 2009(18)

碩士論文
[1]FSH誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的天祝白牦牛卵泡顆粒細(xì)胞凋亡及其對調(diào)控基因Fas/FasLmRNA表達(dá)的影響[D]. 李谷月.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3486212