布魯氏菌�。˙rucellosis）是由布魯氏菌引發(fā)的一種人畜共患傳染病。布魯氏菌能夠抑制細(xì)胞的凋亡和促進(jìn)細(xì)胞的自噬,導(dǎo)致布魯氏菌在吞噬細(xì)胞中生存繁殖,它能引起人、畜多器官損傷和慢性感染,給人類健康和畜牧業(yè)和諧發(fā)展帶來嚴(yán)重威脅。已有研究表明PI3K/Akt信號(hào)通路不僅參與細(xì)胞凋亡、自噬等多種細(xì)胞活動(dòng)和生物學(xué)效應(yīng)還與病原體在細(xì)胞內(nèi)的生存繁殖密切相關(guān),然而,該信號(hào)通路否參與了布魯氏菌在宿主細(xì)胞內(nèi)的生存繁殖尚鮮有報(bào)道,本研究通過探討PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)胞內(nèi)布魯氏菌生存繁殖的影響及與布魯氏菌介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡、自噬的影響,揭示布魯氏菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)持續(xù)性感染的分子機(jī)制,為布魯氏菌病新藥物研發(fā)、防治及家畜抗病育種工作奠定基礎(chǔ)。目的:（1）檢測布魯氏菌及脂多糖是否激活小鼠巨噬細(xì)胞的PI3K/Akt信號(hào)通路。（2）阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路后檢測對(duì)羊種布魯氏菌16M生存繁殖在宿主體內(nèi)外的影響。（3）阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路后檢測對(duì)羊種布魯氏菌16M介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響。（4）阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路后檢測對(duì)羊種布魯氏菌16M介導(dǎo)的細(xì)胞自噬的影響。（5）檢測PI3K催化亞基p110α在羊種布... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：159 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    綜述一 布魯氏菌病發(fā)病的分子機(jī)制研究
        1 布魯氏菌生物學(xué)特征
        2 布魯氏菌的致病機(jī)制
            2.1 布魯氏菌的侵襲和胞內(nèi)生存
            2.2 布魯氏菌毒力相關(guān)因子
            2.3 布魯氏菌與細(xì)胞凋亡
            2.4 布魯氏菌與細(xì)胞自噬
        3 布魯氏菌免疫機(jī)制
        4 PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
第二章 實(shí)驗(yàn)部分
    實(shí)驗(yàn)一 布魯氏菌對(duì)PI3K/AKT信號(hào)通路的激活
        摘要
        1 材料與方法
        2 結(jié)果
            2.1 羊種布魯氏菌 16M對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路的激活
            2.2 不同MOI的 16M對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路的激活
            2.3 粗糙型和光滑型菌株對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路的激活
            2.4 粗糙型和光滑型菌株的LPS對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路的激活
            2.5 抑制劑LY對(duì) 16M介導(dǎo)的PI3K/Akt信號(hào)通路的阻斷
            2.6 抑制劑LY對(duì)巨噬細(xì)胞活性的影響
        3 討論
            3.1 PI3K/Akt信號(hào)通路與疾病的關(guān)系
            3.2 布魯氏菌對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路的激活
            3.3 脂多糖在激活PI3K/Akt信號(hào)通路中的作用
            3.4 外膜蛋白對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路的激活
    實(shí)驗(yàn)二 阻斷PI3K/AKT信號(hào)通路對(duì)羊種布魯氏菌 16M存活的影響
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路抑制 16M的內(nèi)化
            2.2 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路抑制 16M的胞內(nèi)繁殖
            2.3 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路誘導(dǎo) 16M介導(dǎo)的IFN-γ、IL-12p70 和TNF-α的產(chǎn)生
            2.4 LY在小鼠體內(nèi)阻斷 16M介導(dǎo)的PI3K/Akt信號(hào)通路
            2.5 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì) 16M介導(dǎo)的小鼠產(chǎn)生的細(xì)胞因子的影響
            2.6 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì) 16M介導(dǎo)的小鼠體內(nèi)細(xì)胞亞群CD4+T和CD8+T細(xì)胞的影響
            2.8 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì) 16M導(dǎo)致的小鼠內(nèi)臟病理變化的影響
            2.9 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì) 16M在小鼠體內(nèi)存活的影響
            2.10 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì) 16M導(dǎo)致的小鼠致死率的影響
        3 討論
            3.1 細(xì)胞因子與布魯氏菌感染
            3.2 CD4~+和CD8~+T細(xì)胞與布魯氏菌感染
            3.3 布魯氏菌導(dǎo)致機(jī)體的病理變化
    實(shí)驗(yàn)三 阻斷PI3K/AKT信號(hào)通路對(duì)羊種布魯氏菌 16M介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì) 16M介導(dǎo)caspase-3、caspase-8 和caspase-9 活性的影響
            2.2 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì) 16M介導(dǎo)凋亡相關(guān)基因的影響
            2.3 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì) 16M介導(dǎo)凋亡相關(guān)蛋白的影響
            2.4 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì) 16M介導(dǎo)細(xì)胞凋亡率的影響
            2.5 抑制劑Z-DEVD-fmk、Z-IETD-fmk、Z-LEHD-fmk和LY對(duì)細(xì)胞活性的影響。
            2.6 Z-DEVD-fmk和Z-LEHD-fmk對(duì) 16M介導(dǎo)的caspase-3 和caspase-9 活性的影響
            2.8 抑制劑Z-DEVD-fmk、Z-IETD-fmk、Z-LEHD-fmk對(duì)LY誘導(dǎo) 16M介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率的影響
            2.9 抑制caspase-3 或caspase-9 活性對(duì) 16M介導(dǎo)的p-Akt(S473)表達(dá)的影響
        3 討論
            3.1 病原菌與細(xì)胞凋亡
            3.2 Akt與細(xì)胞凋亡
            3.3 PARP與細(xì)胞凋亡
            3.4 Caspase途徑與細(xì)胞凋亡
    實(shí)驗(yàn)四 阻斷PI3K/AKT信號(hào)通路對(duì)羊種布魯氏菌 16M介導(dǎo)細(xì)胞自噬的影響
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 Plex-MSC-EGFP-LC3 質(zhì)粒的酶切驗(yàn)證
            2.2 慢病毒的包裝及轉(zhuǎn)染效果觀察
            2.3 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì) 16M誘導(dǎo)的細(xì)胞中GFP-LC3 陽性點(diǎn)數(shù)的影響
            2.4 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)自噬相關(guān)基因mRNA水平的影響
            2.5 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)自噬相關(guān)基因蛋白水平的影響
            2.6 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)LysoTracker和LC3 共定位的影響
            2.7 阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞中的自噬泡影響
        3 討論
            3.1 細(xì)胞自噬利于布魯氏菌的存活
            3.2 LC3 蛋白與細(xì)胞自噬
            3.3 自噬溶酶體途徑與布魯氏感染
            3.4 PI3K/Akt信號(hào)通路與細(xì)胞自噬
    實(shí)驗(yàn)五 PI3K催化亞基P110Α在羊種布魯氏菌 16M侵染巨噬細(xì)胞過程中的功能
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 pLentiLox-siRNA載體的構(gòu)建
            2.2 慢病毒干擾載體的包裝及轉(zhuǎn)染效果觀察
            2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測干擾片段抑制效果
            2.4 沉默p110α基因?qū)奘杉?xì)胞活性的影響
            2.5 沉默p110α基因?qū)?16M激活PI3K/Akt信號(hào)通路的影響
            2.6 沉默p110α基因?qū)?16M在巨噬細(xì)胞中內(nèi)化的影響
            2.7 沉默p110α基因?qū)?16M在巨噬細(xì)胞內(nèi)存活的影響
            2.8 沉默p110α基因?qū)?16M介導(dǎo)的凋亡相關(guān)基因的影響
            2.9 沉默p110α基因?qū)?16M介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率的影響
            2.10 沉默p110α基因?qū)?16M自噬相關(guān)基因表達(dá)的影響
            2.11 沉默p110α基因?qū)?16M凋亡和自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        3 討論
            3.1 RNA干擾機(jī)制
            3.2 RNA干擾慢病毒載體的優(yōu)點(diǎn)
            3.3 PI3K亞單位結(jié)構(gòu)
            3.4 P13Kp110α的功能
全文結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡介
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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