布魯氏菌病（Brucellosis）是由布魯氏菌引發(fā)的一種人畜共患傳染病。布魯氏菌能夠抑制細胞的凋亡和促進細胞的自噬,導致布魯氏菌在吞噬細胞中生存繁殖,它能引起人、畜多器官損傷和慢性感染,給人類健康和畜牧業(yè)和諧發(fā)展帶來嚴重威脅。已有研究表明PI3K/Akt信號通路不僅參與細胞凋亡、自噬等多種細胞活動和生物學效應還與病原體在細胞內的生存繁殖密切相關,然而,該信號通路否參與了布魯氏菌在宿主細胞內的生存繁殖尚鮮有報道,本研究通過探討PI3K/Akt信號通路對胞內布魯氏菌生存繁殖的影響及與布魯氏菌介導的細胞凋亡、自噬的影響,揭示布魯氏菌在巨噬細胞內持續(xù)性感染的分子機制,為布魯氏菌病新藥物研發(fā)、防治及家畜抗病育種工作奠定基礎。目的:（1）檢測布魯氏菌及脂多糖是否激活小鼠巨噬細胞的PI3K/Akt信號通路。（2）阻斷PI3K/Akt信號通路后檢測對羊種布魯氏菌16M生存繁殖在宿主體內外的影響。（3）阻斷PI3K/Akt信號通路后檢測對羊種布魯氏菌16M介導的細胞凋亡的影響。（4）阻斷PI3K/Akt信號通路后檢測對羊種布魯氏菌16M介導的細胞自噬的影響。（5）檢測PI3K催化亞基p110α在羊種布... 

【文章來源】：石河子大學新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數】：159 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
引言
第一章 文獻綜述
    綜述一 布魯氏菌病發(fā)病的分子機制研究
        1 布魯氏菌生物學特征
        2 布魯氏菌的致病機制
            2.1 布魯氏菌的侵襲和胞內生存
            2.2 布魯氏菌毒力相關因子
            2.3 布魯氏菌與細胞凋亡
            2.4 布魯氏菌與細胞自噬
        3 布魯氏菌免疫機制
        4 PI3K/AKT信號轉導通路
第二章 實驗部分
    實驗一 布魯氏菌對PI3K/AKT信號通路的激活
        摘要
        1 材料與方法
        2 結果
            2.1 羊種布魯氏菌 16M對PI3K/Akt信號通路的激活
            2.2 不同MOI的 16M對PI3K/Akt信號通路的激活
            2.3 粗糙型和光滑型菌株對PI3K/Akt信號通路的激活
            2.4 粗糙型和光滑型菌株的LPS對PI3K/Akt信號通路的激活
            2.5 抑制劑LY對 16M介導的PI3K/Akt信號通路的阻斷
            2.6 抑制劑LY對巨噬細胞活性的影響
        3 討論
            3.1 PI3K/Akt信號通路與疾病的關系
            3.2 布魯氏菌對PI3K/Akt信號通路的激活
            3.3 脂多糖在激活PI3K/Akt信號通路中的作用
            3.4 外膜蛋白對PI3K/Akt信號通路的激活
    實驗二 阻斷PI3K/AKT信號通路對羊種布魯氏菌 16M存活的影響
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 阻斷PI3K/Akt信號通路抑制 16M的內化
            2.2 阻斷PI3K/Akt信號通路抑制 16M的胞內繁殖
            2.3 阻斷PI3K/Akt信號通路誘導 16M介導的IFN-γ、IL-12p70 和TNF-α的產生
            2.4 LY在小鼠體內阻斷 16M介導的PI3K/Akt信號通路
            2.5 阻斷PI3K/Akt信號通路對 16M介導的小鼠產生的細胞因子的影響
            2.6 阻斷PI3K/Akt信號通路對 16M介導的小鼠體內細胞亞群CD4+T和CD8+T細胞的影響
            2.8 阻斷PI3K/Akt信號通路對 16M導致的小鼠內臟病理變化的影響
            2.9 阻斷PI3K/Akt信號通路對 16M在小鼠體內存活的影響
            2.10 阻斷PI3K/Akt信號通路對 16M導致的小鼠致死率的影響
        3 討論
            3.1 細胞因子與布魯氏菌感染
            3.2 CD4~+和CD8~+T細胞與布魯氏菌感染
            3.3 布魯氏菌導致機體的病理變化
    實驗三 阻斷PI3K/AKT信號通路對羊種布魯氏菌 16M介導細胞凋亡的影響
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 阻斷PI3K/Akt信號通路對 16M介導caspase-3、caspase-8 和caspase-9 活性的影響
            2.2 阻斷PI3K/Akt信號通路對 16M介導凋亡相關基因的影響
            2.3 阻斷PI3K/Akt信號通路對 16M介導凋亡相關蛋白的影響
            2.4 阻斷PI3K/Akt信號通路對 16M介導細胞凋亡率的影響
            2.5 抑制劑Z-DEVD-fmk、Z-IETD-fmk、Z-LEHD-fmk和LY對細胞活性的影響。
            2.6 Z-DEVD-fmk和Z-LEHD-fmk對 16M介導的caspase-3 和caspase-9 活性的影響
            2.8 抑制劑Z-DEVD-fmk、Z-IETD-fmk、Z-LEHD-fmk對LY誘導 16M介導的細胞凋亡率的影響
            2.9 抑制caspase-3 或caspase-9 活性對 16M介導的p-Akt(S473)表達的影響
        3 討論
            3.1 病原菌與細胞凋亡
            3.2 Akt與細胞凋亡
            3.3 PARP與細胞凋亡
            3.4 Caspase途徑與細胞凋亡
    實驗四 阻斷PI3K/AKT信號通路對羊種布魯氏菌 16M介導細胞自噬的影響
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 Plex-MSC-EGFP-LC3 質粒的酶切驗證
            2.2 慢病毒的包裝及轉染效果觀察
            2.3 阻斷PI3K/Akt信號通路對 16M誘導的細胞中GFP-LC3 陽性點數的影響
            2.4 阻斷PI3K/Akt信號通路對自噬相關基因mRNA水平的影響
            2.5 阻斷PI3K/Akt信號通路對自噬相關基因蛋白水平的影響
            2.6 阻斷PI3K/Akt信號通路對LysoTracker和LC3 共定位的影響
            2.7 阻斷PI3K/Akt信號通路對細胞中的自噬泡影響
        3 討論
            3.1 細胞自噬利于布魯氏菌的存活
            3.2 LC3 蛋白與細胞自噬
            3.3 自噬溶酶體途徑與布魯氏感染
            3.4 PI3K/Akt信號通路與細胞自噬
    實驗五 PI3K催化亞基P110Α在羊種布魯氏菌 16M侵染巨噬細胞過程中的功能
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 pLentiLox-siRNA載體的構建
            2.2 慢病毒干擾載體的包裝及轉染效果觀察
            2.3 實時熒光定量PCR檢測干擾片段抑制效果
            2.4 沉默p110α基因對巨噬細胞活性的影響
            2.5 沉默p110α基因對 16M激活PI3K/Akt信號通路的影響
            2.6 沉默p110α基因對 16M在巨噬細胞中內化的影響
            2.7 沉默p110α基因對 16M在巨噬細胞內存活的影響
            2.8 沉默p110α基因對 16M介導的凋亡相關基因的影響
            2.9 沉默p110α基因對 16M介導的細胞凋亡率的影響
            2.10 沉默p110α基因對 16M自噬相關基因表達的影響
            2.11 沉默p110α基因對 16M凋亡和自噬相關蛋白表達的影響
        3 討論
            3.1 RNA干擾機制
            3.2 RNA干擾慢病毒載體的優(yōu)點
            3.3 PI3K亞單位結構
            3.4 P13Kp110α的功能
全文結論
創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
個人簡介
附件


【參考文獻】：
期刊論文
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[4]中國布魯氏菌病疫情監(jiān)測與控制[J]. 崔步云.  疾病監(jiān)測. 2007(10)
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本文編號：3485425