利用生物信息學(xué)方法分析牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）E^rns蛋白,篩選出優(yōu)勢(shì)B淋巴細(xì)胞（簡(jiǎn)稱B細(xì)胞）和T淋巴細(xì)胞（簡(jiǎn)稱T細(xì)胞）表位組裝成多表位蛋白,并在大腸埃希菌中進(jìn)行表達(dá)和驗(yàn)證。首先從NCBI GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)獲得E^rns蛋白的氨基酸序列,將所得到的序列進(jìn)行理化性質(zhì)、跨膜結(jié)構(gòu)域、亞細(xì)胞定位、磷酸化、�；稽c(diǎn)分析,預(yù)測(cè)二級(jí)結(jié)構(gòu)及二硫鍵的位置,使用4種B細(xì)胞和2種T細(xì)胞軟件預(yù)測(cè)其抗原表位,將預(yù)測(cè)的表位進(jìn)行篩選并組裝成多表位疫苗,進(jìn)行密碼子優(yōu)化確保其在大腸埃希菌中高效表達(dá),最后進(jìn)行蛋白的純化和Western blot驗(yàn)證。結(jié)果顯示,E^rns蛋白由227個(gè)氨基酸殘基組成,分子質(zhì)量約為26 ku,理論等電點(diǎn)8.62,化學(xué)式為C₁₁₃₁H₁₇₆₈N₃₂₆O₃₃₅S₁₄,不穩(wěn)定系數(shù)為29.98,親水性平均值（GRAVY）和脂肪指數(shù)分別-0.529和71.37,在大腸埃希菌體內(nèi)半衰期大于10 h,不具有跨膜結(jié)構(gòu)域,主要定位... 

【文章來源】：動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,41(08)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

菌液PCR鑒定結(jié)果

SDS-PAGE結(jié)果顯示,在誘導(dǎo)后2 h、4 h、6 h和8 h得到大小約為28 ku蛋白,與理論值相符,并且在6 h時(shí)蛋白表達(dá)量達(dá)到最大(圖3)。超聲破碎的菌液經(jīng)SDS-PAGE分析,結(jié)果顯示以可溶性和包涵體兩種形式表達(dá),但以包涵體為主(圖4)。2.11 多表位蛋白的純化Western blot鑒定結(jié)果

在生物信息學(xué)快速發(fā)展的今天,設(shè)計(jì)多表位亞單位疫苗已經(jīng)成為一種新的方法來引發(fā)體液和細(xì)胞免疫,增強(qiáng)宿主保護(hù)性免疫應(yīng)答[14-15],而且設(shè)計(jì)開發(fā)的多表位嵌合抗原在用于疫苗和血清學(xué)診斷中,不僅成本較低,而且靈敏度也在不斷提高[16-18]。本研究使用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)并篩選出具有強(qiáng)免疫原性的多表位蛋白。圖4 多表位蛋白表達(dá)形式的鑒定結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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