無(wú)角間性綜合癥（Polled Intersex Syndrome，PIS）是由于一段位于1q23的11.7kbDNA序列的缺失導(dǎo)致山羊無(wú)角與間性緊密連鎖的一種疾病。研究發(fā)現(xiàn)，11.7kb的DNA片段為非編碼序列，但表現(xiàn)出轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用，被調(diào)控的基因至少存在2個(gè)：PIS區(qū)調(diào)控的第一個(gè)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物PISRT1（PIS regulated transcript number1）和叉頭蛋白FOXL2（forkhead box L2）。山羊PISRT1基因不編碼蛋白質(zhì)，在轉(zhuǎn)錄水平發(fā)揮其功能，目前已初步認(rèn)定為睪丸抑制因子。FOXL2基因編碼一個(gè)典型的叉頭蛋白轉(zhuǎn)錄因子，具有決定卵巢發(fā)育的作用。PIS區(qū)域的缺失并不是引起山羊間性的唯一原因，為探究山羊間性的作用機(jī)制，本研究從唐山奶山羊的性別鑒定入手，探究了奶山羊性別遺傳學(xué)基礎(chǔ)；對(duì)PISRT1和FOXL2基因多態(tài)性進(jìn)行分析并探究?jī)苫蛟陂g性和正常奶山羊中的變異差異以及兩基因的相互作用關(guān)系；使用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)了山羊PISRT1、FOXL2基因的啟動(dòng)子區(qū)，并對(duì)FOXL2基因啟動(dòng)子區(qū)進(jìn)行了活性分析。通過(guò)對(duì)34只間性奶山羊性別決定基因SRY的PCR擴(kuò)增結(jié)果表明，... 

【文章來(lái)源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PIS區(qū)域結(jié)構(gòu)圖

及來(lái)源28 個(gè)正常唐山奶山羊血樣和 33 個(gè)間性唐山奶山羊血樣均由實(shí)大腸桿菌 DH5α 菌種由本實(shí)驗(yàn)室凍存。MD 19-T 載體為寶生物工程有限公司產(chǎn)品；綠色熒光蛋白質(zhì)粒asic 、pGL3-Control、PRL-TK 載體均由北京原平皓生物技術(shù) 載體缺失真核啟動(dòng)子及增強(qiáng)子等轉(zhuǎn)錄元件，但包含多種酶切位0 poly A 信號(hào)（如圖 2-1）。因此，pGL3-Basic 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后因上游酶切位點(diǎn)插入的目的基因片段是否具有轉(zhuǎn)錄活性。pG的 Luc 基因上游插入了 SV40 啟動(dòng)子并且在下游插入了 SV40 的細(xì)胞中會(huì)表達(dá)熒光素酶 Luc 報(bào)告基因；PRL-TK 載體有 HSV種細(xì)胞中組成性的表達(dá)海腎熒光素酶，同樣該質(zhì)粒由北京原平

表 2-3 擴(kuò)增山羊 PISRT1 基因序列引物Table 2-3 Primers for amplification of PISRT1 gene in goat名稱 引物序列 產(chǎn)物長(zhǎng)度PIS1-1S CTGGGTATCTAGATGGATGAGGCPIS1-1A CCATGTGTCTGAACCCCAGTC745bpPISrt1-2S GATGTTTATGTGTGCACGCTCCPISrt1-2A ACCGAGGAGGAAATTCACACAG820bpPISrt1-3S CACTTTCTGGCATGATGGATGGPISrt1-3A CCTTCACTTGCCTTCTTGCCTC720bp 啟動(dòng)子生物信息學(xué)分析于 PISRT1 和 FOXL2 基因的生物信息學(xué)分析主要由以下三個(gè)方面組成：（1）確定基應(yīng)的轉(zhuǎn)錄本和其所對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)，明確其 mRNA 和 gDNA 序列；（2）搜索及確定的 mRNA 序列；（3）利用生物信息學(xué)軟件對(duì) PISRT1 基因和 FOXL2 基因 5'末端附近的行一系列的分析，如 CpG 島分析、核心啟動(dòng)子預(yù)測(cè)、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的預(yù)測(cè)。如圖 2-2 所示：

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3481334