本實驗旨在構(gòu)建敖漢細毛羊Noggin基因表達載體,將其轉(zhuǎn)染至成纖維細胞中,分析Noggin基因mRNA及蛋白表達量的變化。實驗以40日齡胎羊為研究對象,采集組織樣品,通過PCR反應(yīng)擴增目的基因片段,經(jīng)切膠回收后連接到pEM-T1載體,構(gòu)建pEM-T1-Noggin后轉(zhuǎn)染到大腸桿菌（E.coli）DH5α感受態(tài)細胞,提取pEM-T1-Noggin后進行酶切鑒定。鑒定后符合標準即可構(gòu)建pcDNA3.1-Noggin重組表達載體,轉(zhuǎn)至大腸桿菌（E.coli）DH5α感受態(tài)細胞振蕩培養(yǎng),將重組質(zhì)粒pcDNA3.1-Noggin轉(zhuǎn)染成纖維細胞,利用實時熒光定量PCR技術(shù)和Western Blot技術(shù)檢測Noggin基因在成纖維細胞中表達量的變化。結(jié)果表明:經(jīng)酶切、測序鑒定pcDNA3.1-Noggin表達載體構(gòu)建成功,并成功瞬時轉(zhuǎn)染成纖維細胞,轉(zhuǎn)染組的mRNA及蛋白表達量均極顯著高于對照組。本研究在細胞水平上驗證了Noggin基因功能,為進一步在個體水平上研究Noggin基因功能奠定基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國畜牧雜志. 2020,56(09)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

Noggin基因PCR擴增

1 Noggin蛋白相對表達量

對pGM-T-Noggin進行提取，結(jié)果如圖2所示，pGM-T載體大小為3 015 bp、目的基因大小為699 bp，連接后條帶位于3 714 bp處，與已知大小相符，表明克隆載體連接并提取成功。2.3 TA克隆測序比對

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]影響綿羊毛纖維與毛囊結(jié)構(gòu)及生產(chǎn)性狀的分子機理研究[D]. 李樹偉.吉林大學(xué) 2008



本文編號：3478838