酶標(biāo)二抗是一種伴隨著免疫檢測誕生的試劑,既擁有作為抗體的高度特異性和敏感性,又擁有可以高效催化酶底物的能力。對比直接進(jìn)行免疫檢測的酶標(biāo)一抗具有提高效率、降低成本、減少假陽性和信號級聯(lián)放大的作用。羊抗雞酶標(biāo)二抗與同類產(chǎn)品相比具有諸多優(yōu)勢,以雞作為抗原的免疫宿主擁有更廣的抗原測定的范圍,將羊抗體作為二抗則擁有很大的市場前景。羊抗雞酶標(biāo)二抗的制備有四個關(guān)鍵技術(shù),即雞卵黃抗體的提純、羊免疫反應(yīng)、羊血清（血漿）抗體的提純以及酶聯(lián)反應(yīng)。本研究在綜合前人研究工作的基礎(chǔ)上,擬建立酶標(biāo)二抗的制備方法。論文實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:（1）以多個方法制備雞卵黃抗體IgY并對各方法進(jìn)行比較。水稀釋-乙醇分級沉淀,氯仿-乙醇分級沉淀,氯仿-DEAE柱層析以及氯仿-硫酸銨二次沉淀法得到的蛋白質(zhì)純度分別:54%,55%,80%和91%。水稀釋-乙醇分級沉淀法IgY得率為11.99mg每個雞蛋,氯仿-乙醇分級沉淀法蛋白得率為16.50mg每個雞蛋,四種方法中IgY得率最高的是氯仿-硫酸銨二次沉淀法,每個雞蛋中可以提取17.26mg IgY。氯仿-DEAE柱層析法和氯仿-硫酸銨二次沉淀法都可以得到高純度IgY,但綜合效率和成本等因... 

【文章來源】：蘭州理工大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 酶標(biāo)抗體
        1.1.1 酶標(biāo)抗體簡介
        1.1.2 酶標(biāo)二抗
        1.1.3 酶標(biāo)二抗的應(yīng)用
    1.2 雞卵黃抗體
        1.2.1 雞卵黃抗體簡介
        1.2.2 雞卵黃抗體的提純
        1.2.3 抗體的純度檢測
    1.3 羊血清抗體
        1.3.1 羊血清抗體簡介
        1.3.2 羊血清抗體的純化
    1.4 辣根過氧化物酶
        1.4.1 辣根過氧化物酶簡介
        1.4.2 辣根過氧化物酶結(jié)構(gòu)
        1.4.3 辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體
    1.5 酶標(biāo)二抗效價的測定
    1.6 研究意義
    1.7 研究內(nèi)容
第二章 雞卵黃抗體的提純
    2.1 實(shí)驗(yàn)器材
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 水稀釋-乙醇分級沉淀法提純IgY
        2.2.2 氯仿-乙醇分級沉淀法提純抗體
        2.2.3 二氯甲烷-乙醇分級沉降法提純抗體
        2.2.4 氯仿粗提-DEAE瓊脂糖凝膠柱層析法提純雞卵黃抗體
        2.2.5 氯仿-硫酸銨二次沉淀法提純雞卵黃抗體
        2.2.6 Bradford法檢測IgY樣品的蛋白質(zhì)濃度
        2.2.7 SDS-PAGE檢測IgY純度
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 提純后的蛋白濃度及產(chǎn)率計(jì)算
        2.3.2 SDS-PAGE檢測IgY純度
        2.3.3 SDS-PAGE檢測氯仿粗提-DEAE柱層析法
        2.3.4 SDS-PAGE檢測氯仿-硫酸銨二次沉淀法結(jié)果
第三章 羊免疫反應(yīng)
    3.1 實(shí)驗(yàn)器材
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑的配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 羊免疫反應(yīng)抗原制備方法
        3.2.2 羊免疫反應(yīng)方法
        3.2.3 SDS-PAGE檢測IgY純度
        3.2.4 SDS-PAGE檢測羊血漿中的總蛋白
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
        3.3.1 一抗制備結(jié)果
        3.3.2 羊免疫反應(yīng)
        3.3.3 羊血漿蛋白SDS-PAGE檢測
第四章 羊抗體的提純
    4.1 實(shí)驗(yàn)器材
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑的配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 羊血漿的制備
        4.2.2 辛酸-硫酸銨法提取羊血漿中的抗體
        4.2.3 SDS-PAGE檢測IgG純度
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
第五章 HRP標(biāo)記羊抗雞二抗及活性檢測
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)主要試劑配制
        5.2.2 高碘酸鈉氧化法標(biāo)記抗體
        5.2.3 Western Blot檢測酶標(biāo)二抗活性
        5.2.4 HRP和酶標(biāo)IgG化學(xué)發(fā)光檢測
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄A:攻讀學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄



本文編號：3477969