【目的】為了增強(qiáng)纖維素酶的酶解效率,提高纖維素的利用率,本實(shí)驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)室之前工作的基礎(chǔ)上以大腸桿菌質(zhì)粒為載體成功克隆并表達(dá)了EG基因。同時(shí),以乳酸菌質(zhì)粒為載體共分泌表達(dá)了bglA、bglB基因。本實(shí)驗(yàn)不但對(duì)進(jìn)一步研究纖維素酶的酶解機(jī)制提高纖維素的利用率起到了一定的幫助作用,同時(shí)也為新型動(dòng)物飼料的研究提供了新的思路,在實(shí)驗(yàn)室工作的開展中也起到了承上啟下的作用。【方法】（1）根據(jù)GenBank b.polymyxa的EG基因序列設(shè)計(jì)引物,從多粘類芽孢桿菌中提取基因組作為模板擴(kuò)增EG基因,然后將得到的目的片段與pBluescript II KS（+）鏈接,將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至E.coli DH5α,將測(cè)序結(jié)果正確的EG基因酶切后連接到pET-28a質(zhì)粒上,并轉(zhuǎn)入E.coli BL21,最后將雙酶切驗(yàn)證合適的工程菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)使其表達(dá)出蛋白,用鎳柱純化蛋白后通過(guò)DNS法檢測(cè)蛋白活性。（2）分別根據(jù)GenBank中L.lactis MG1363 usp45基因序列設(shè)計(jì)信號(hào)肽和b.polymyxa的BG基因bglA、bglB序列設(shè)計(jì)A、B的上游引物以及下游引物。然后以信號(hào)肽的上游為上游引物,分別以A、... 

【文章來(lái)源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
縮略詞中英文對(duì)照表
第一章 緒論
    1、纖維素的概述
    2、纖維素的結(jié)構(gòu)
    3、研究背景
        3.1 國(guó)內(nèi)外纖維素研究利用對(duì)比
        3.2 纖維素的開發(fā)利用現(xiàn)狀
    4、纖維素酶的概述
        4.1 纖維素酶的來(lái)源及結(jié)構(gòu)
        4.2 纖維素酶的作用機(jī)理
        4.3 纖維素酶活性的影響因素
        4.4 纖維素酶的應(yīng)用
        4.5 纖維素酶的發(fā)展趨勢(shì)
    5、研究?jī)?nèi)容與方法
        5.1 EG基因在大腸桿菌中的表達(dá)
        5.2 多粘類芽孢桿菌bglA、bglB基因在乳酸菌中的共分泌表達(dá)
    6、研究目的與意義
第二章 EG基因在大腸桿菌中的表達(dá)
    1、材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 EG克隆與表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2 EG誘導(dǎo)表達(dá)及SDS-PAGE電泳
        2.3 DNS法檢測(cè)蛋白活性
    3、分析討論
第三章 多粘類芽孢桿菌bglA、bglB基因在乳酸菌中的共分泌表達(dá)
    1、材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 bglA、bglB克隆與表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及SDS-PAGE電泳
        2.3 剛果紅染色
        2.4 DNS法測(cè)定重組菌株酶活
    3、分析討論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]生物質(zhì)納米纖維素及其自聚集氣凝膠的制備與結(jié)構(gòu)性能研究[D]. 陳文帥.東北林業(yè)大學(xué) 2013
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