腸出血性大腸桿菌（EHEC）是腹瀉性大腸桿菌中重要的一類,屬于人畜共患病原菌。主要引起人的出血性腸炎。其中0157：H7是它的一個重要的血清型,在全世界眾多散發(fā)或暴發(fā)流行的腹瀉病例中經(jīng)常涉及到。EHEC O157:H7主要是通過污染食物被人類食用后引發(fā)感染,屬于食源性致病菌。并且少量的活菌就能導(dǎo)致EHEC O157:H7的感染,使得疾病發(fā)生的危險(xiǎn)高于其他病原菌。因此,加強(qiáng)EHEC O157:H7的檢測極為重要。而傳統(tǒng)的細(xì)菌分離鑒定方法耗時(shí)長,操作繁瑣。其他的一些實(shí)驗(yàn)室檢測方法對儀器設(shè)備及操作人員都有一定的要求,不適用于基層檢測及大批量樣品的篩查。本研究利用兩株特異性的單克隆抗體,結(jié)合膠體金免疫層析技術(shù),以建立一種靈敏、特異、快速、簡便的EHEC O157:H7檢測方法。1. EHEC O157:H7單克隆抗體的篩選利用相加ELISA試驗(yàn)對實(shí)驗(yàn)室制備的8株針對EHEC O157:H7菌體抗原的單克隆抗體進(jìn)行篩選,挑選出抗原識別表位影響最小的兩株單抗1H3、6F4。其中1H3為IgG,6F4為IgM。對6F4進(jìn)行辣根過氧化物酶標(biāo)記,對1H3和HRP-6F4進(jìn)行競爭ELISA試驗(yàn),證明兩株單... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
1. 前言
    1.1 食源性疾病與食源性致病菌
    1.2 腸出血性大腸桿菌O157：H7(EHEC O157：H7)概況
        1.2.1 EHEC O157：H7病原學(xué)特征
        1.2.2 EHEC O157：H7主要致病機(jī)理及毒力因子
        1.2.3 EHEC O157：H7的流行病學(xué)特點(diǎn)
        1.2.4 EHEC O157：H7臨床特征及危害
        1.2.5 EHEC O157：H7的檢測方法的研究進(jìn)展
    1.3 膠體金免疫層析技術(shù)
    1.4 研究目的與意義
2. 材料及方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株及抗體
        2.1.2 主要器材
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 EHEC O157：H7的培養(yǎng)及處理
        2.2.2 McAb識別表位鑒定
        2.2.3 雜交瘤細(xì)胞復(fù)蘇與McAb制備
        2.2.4 EHEC O157：H7膠體金檢測試紙條制備
        2.2.5 膠體金試紙條性能評價(jià)
        2.2.6 人工模擬污染樣品檢測
        2.2.7 市場豬肉樣品檢測
3. 結(jié)果與分析
    3.1 McAb識別表位鑒定
        3.1.1 相加ELISA試驗(yàn)
        3.1.2 競爭ELISA試驗(yàn)
    3.2 雜交瘤細(xì)胞復(fù)蘇與McAb制備純化
        3.2.1 雜交瘤細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)
        3.2.2 腹水純化
    3.3 EHEC O157：H7膠體金檢測試紙條制備
        3.3.1 膠體金制備
        3.3.2 膠體金最適抗體標(biāo)記量測定
        3.3.3 膠體金最佳標(biāo)記pH值測定
        3.3.4 膠體金試紙條組裝
        3.3.5 封閉液的選擇
        3.3.6 樣品稀釋液的選擇
        3.3.7 膠體金試紙條制備條件的確定
        3.3.8 膠體金試紙條特異性
        3.3.9 膠體金試紙條靈敏度
        3.3.10 膠體金試紙條重復(fù)性
    3.4 人工模擬污染樣品檢測
    3.5 市場豬肉樣品檢測
4. 討論
    4.1 關(guān)于以兩株單抗制備膠體金試紙條的分析
    4.2 關(guān)于單抗識別位點(diǎn)分析
    4.3 關(guān)于IgM型單抗的純化分析
    4.4 關(guān)于膠體金試紙條性能影響因素分析
    4.5 關(guān)于EHEC O157：H7檢測樣品的前處理分析
5. 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3470305