非洲豬瘟是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（Office International desépizooties,OIE）規(guī)定的法定報(bào)告動(dòng)物疫病,也是最近兩年在我國(guó)傳播范圍較廣的一類動(dòng)物疫病。其病原體為非洲豬瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）,是非洲豬瘟病毒科非洲豬瘟病毒屬的唯一成員,也是唯一通過(guò)節(jié)肢動(dòng)物進(jìn)行傳播的DNA病毒。非洲豬瘟病毒天然宿主為野豬和蜱蟲,主要感染家豬、野豬和軟蜱蟲,家豬感染后多表現(xiàn)為內(nèi)臟劇烈出血、高熱、呼吸障礙等臨床癥狀,病死率可達(dá)100%。由于ASFV存活時(shí)間久、傳播途徑廣泛且無(wú)有效疫苗加以防控,目前只能通過(guò)對(duì)發(fā)病豬只和染毒豬只大量捕殺、就地深埋的方式對(duì)疫情加以控制,對(duì)全球養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此,開發(fā)效果佳、安全性高的非洲豬瘟疫苗已經(jīng)迫在眉睫。干酪乳桿菌（Lactobcillus casei）作為人和動(dòng)物腸道、呼吸道和泌尿生殖道的益生菌群之一,在食品和發(fā)酵領(lǐng)域中的長(zhǎng)期應(yīng)用早已被證明其安全性。干酪乳桿菌能夠非特異性地提高人和動(dòng)物的免疫力,尤其能夠促進(jìn)粘膜免疫。干酪乳桿菌也可以作為外源蛋白的表達(dá)載體,誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性的粘膜免疫和系統(tǒng)性... 

【文章來(lái)源】：山東師范大學(xué)山東省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pET-28a-P72重組質(zhì)粒消化鑒定圖

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文31腸桿菌原核表達(dá)載體pET-28a中，形成重組質(zhì)粒pET-28a-P72、pET-28a-sP72。如圖2-1所示，經(jīng)過(guò)限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ和XhoⅠ消化鑒定，電泳后顯示質(zhì)粒pET-28a-P72有空載約5369bp、目的片段約1941bp；如圖2-2所示，質(zhì)粒pET-28a-sP72有空載約5369bp、目的片段約627bp。消化鑒定結(jié)束后將質(zhì)粒送至青島擎科生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序鑒定。應(yīng)用NCBI及DNAMAN進(jìn)行序列比對(duì)證明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。3.1.1pET-28a-P72、pET-28a-sP72原核表達(dá)載體消化鑒定圖2-1：pET-28a-P72重組質(zhì)粒消化鑒定圖M：DL-10000Marker，1-2：pET-28a-P72重組質(zhì)粒，3-4：pET-28a-P72重組質(zhì)粒EcoRⅠ、XhoⅠ消化鑒定圖2-2：pET-28a-sP72重組質(zhì)粒消化鑒定圖M：DL-10000Marker，1：pET-28a-sP72重組質(zhì)粒，2：pET-28a-sP72重組質(zhì)粒EcoRⅠ、XhoⅠ消化鑒定

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文323.1.2pET-28a-P72、pET-28a-sP72原核表達(dá)載體測(cè)序鑒定圖2-3：pET-28a-P72測(cè)序鑒定圖2-4：pET-28a-sP72測(cè)序鑒定3.2SDS-PAGE鑒定蛋白表達(dá)最佳條件3.2.1P72蛋白表達(dá)將重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-P72轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21感受態(tài)中，利用IPTG誘導(dǎo)P72蛋白的表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳的分離后可觀察到大腸桿菌中各蛋白表達(dá)情況。如圖2-5所示，在合理選用不同IPTG濃度、誘導(dǎo)時(shí)間、誘導(dǎo)溫度等條件下進(jìn)行培養(yǎng)，P72蛋白均未見明顯表達(dá)。進(jìn)一步對(duì)目標(biāo)條帶處進(jìn)行WesternBlotting鑒定，結(jié)果如2-6所示，在72KD附近無(wú)特異性條帶。由此可證實(shí)P72蛋白在大腸桿菌中確實(shí)未表達(dá)。


本文編號(hào)：3469182