旨在克隆雞H+/肌醇轉(zhuǎn)運蛋白（H+/myoinositol transporter,HMIT）基因的轉(zhuǎn)錄序列,并檢測HMIT基因在雞不同組織中的表達(dá)情況,以及外源胰島素處理對HMIT基因相對表達(dá)量的影響。本研究以AA肉雞為試驗動物,采用RT-PCR技術(shù)克隆雞HMIT基因全編碼區(qū)序列,采用生物信息學(xué)技術(shù)分析其編碼蛋白的生物學(xué)特性,利用熒光定量PCR檢測HMIT基因在大腦、肝、腹脂、腿肌、心、腎、空腸和回腸等組織中的表達(dá)情況,并檢測其在腎和大腦中進(jìn)行胰島素處理120和240 min后的表達(dá)情況。結(jié)果表明,以NCBI預(yù)測的雞HMIT（XM₀01232939.5）序列為模板設(shè)計引物,成功克隆出雞HMIT基因（1 694 bp,GenBank登錄號:MN708211）�？寺〉碾uHMIT編碼區(qū)全長1 380 bp,相比XM₀01232939.5預(yù)測的編碼序列少561 bp,預(yù)測編碼含有459個氨基酸組成的蛋白。核苷酸和氨基酸序列比對發(fā)現(xiàn),雞HMIT在物種間高度同源,共線性分析顯示,HMIT所在的1號染色體區(qū)域在物種間也是高度保守的。HMIT編碼的蛋白質(zhì)是... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2020,51(08)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

人和雞HMIT蛋白結(jié)構(gòu)域分析

采用NCBI上的ORF Finder 對本研究克隆得到的雞HMIT 序列分析發(fā)現(xiàn),雞HMIT含有一個長161 bp的5′UTR,一個長1 380 bp的ORF(open reading frame),一個長153 bp的3′UTR,預(yù)測編碼一個由459個氨基酸組成的蛋白。利用UCSC在線數(shù)據(jù)庫的Blat查找HMIT在基因組位置和外顯子的分布情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn),雞HMIT位于1號染色體上,CDS區(qū)跨越的基因組大小為102 545 bp,共包含9個外顯子,長度在109～227 bp之間,且剪接供體和受體都符合GT-AG法則。將本研究克隆得到的雞HMIT編碼序列結(jié)構(gòu)與已知的人HMIT (NM_052885.4)基因結(jié)構(gòu)相比(表2),克隆的雞HMIT比人HMIT 缺少第一外顯子和第二外顯子的部分序列。表2 雞與人HMIT基因CDS區(qū)基因組結(jié)構(gòu)比較Table 2 Genomic structural comparison of HMIT CDS between chicken and human 外顯子Exon 雞 Chicken 人 Human 外顯子區(qū)域1/bpExon region 外顯子大小/bpExon size 外顯子區(qū)域2/bpExon region 外顯子大小/bpExon size 1 1～149 149 1～556 556 2 150～358 209 557～716 160 3 359～467 109 717～925 209 4 468～631 164 926～1 034 109 5 632～752 121 1 035～1 198 164 6 753～878 126 1 199～1 319 121 7 879～1 000 122 1 320～1 445 126 8 1 001～1 153 153 1 446～1 567 122 9 1 154～1 380 227 1 568～1 720 153 10 - - 1 721～1 947 227 1．根據(jù)雞HMIT基因GenBank登錄號：MN708211;2．根據(jù)人HMIT基因GenBank登錄號：NM＿052885.41.The HMITgene of chicken GenBank ID:MN708211;2.The HMITgene of human GenBank ID:NM＿052885.4

用羅氏血糖儀檢測胰島素和PBS處理后不同時間點雞的血糖濃度,結(jié)果顯示(圖7B),注射60、120和240 min后,INS組血糖濃度極顯著低于PBS組(P<0.01),且血糖濃度在120 min達(dá)到最低。組織表達(dá)結(jié)果顯示,雞HMIT在大腦和腎表達(dá)量最高,血糖檢測結(jié)果顯示,胰島素處理后120和240 min血糖濃度較低。通過熒光定量PCR檢測HMIT基因在腎和大腦中外源胰島素處理120和240 min后的表達(dá)情況,結(jié)果顯示,在腎的INS組中(圖7C),HMIT在240 min的表達(dá)量顯著高于120 min(P<0.05),在240 min時,腎中HMIT在INS組的表達(dá)量顯著低于PBS組(P<0.05)。在大腦的INS組中(圖7D),HMIT在240 min的表達(dá)量同樣高于120 min,但未達(dá)到顯著水平,在240 min 時,大腦中HMIT在INS組的表達(dá)量顯著低于PBS組(P<0.05),表現(xiàn)出與腎中同樣的表達(dá)規(guī)律。圖3 HMIT基因組區(qū)域的保守共線性

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬Nrf2基因克隆、生物信息學(xué)分析及啟動子區(qū)轉(zhuǎn)錄活性分析[J]. 劉宗立,陳濤,楊丹丹,崔景香,李川皓,曾勇慶,陳偉.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2019(07)
[2]豬MYNN基因可變剪接體的克隆及表達(dá)特性研究[J]. 郭曉紅,李萌,高鵬飛,曹果清,成志敏,張寧芳,樂寶玉,劉劍鋒,劉小軍,李步高.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2018(03)



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