弓形蟲(chóng)（Toxoplasma gondii, T. gondii）和新孢子蟲(chóng)（Neospora caninium, N. caninum）都是專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲(chóng),同屬頂復(fù)亞門,二者在形態(tài)學(xué)特征和生物學(xué)特性上有許多相似之處,但是它們對(duì)小鼠的急性毒力卻存在顯著差異。許多研究已經(jīng)表明弓形蟲(chóng)棒狀體蛋白18（T. gondii rhoptry protein18, TgROP18）是其最重要的毒力因子,介導(dǎo)了弓形蟲(chóng)Ⅰ型強(qiáng)毒株與Ⅲ型弱毒株的毒力差異。本研究通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)新孢子蟲(chóng)棒狀體蛋白18（N. caninum rhoptry protein18, NcROP18）的基因序列中插入了多個(gè)終止密碼子,不能表達(dá)相應(yīng)的功能蛋白,是一個(gè)假基因。因此,我們推測(cè)弓形蟲(chóng)與新孢子蟲(chóng)ROP18的差異可能是導(dǎo)致它們急性毒力差異的重要因素�；谏鲜鲈�,我們開(kāi)展了如下研究。首先將弓形蟲(chóng)Ⅰ型蟲(chóng)株RH株的TgROP18定向克隆至pDMG表達(dá)載體,構(gòu)建了以綠色熒光蛋白（GFP）為報(bào)告基因、乙胺嘧啶抗性基因CDHFR-TS)為篩選標(biāo)記的pDMG-TgROP18-GFP轉(zhuǎn)染質(zhì)粒。通過(guò)電轉(zhuǎn)化方法將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入新孢子蟲(chóng)Nc1株... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 弓形蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因?qū)W研究進(jìn)展
    1.2 新孢子蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因?qū)W研究進(jìn)展
    1.3 弓形蟲(chóng)毒力因子研究進(jìn)展
    1.4 弓形蟲(chóng)和新孢子蟲(chóng)致病性差異的思考
第二章 表達(dá)TGROP18的轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)的構(gòu)建
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 TgROP18與NcROP18基因序列比對(duì)分析
        2.3.2 重組質(zhì)粒pDMG-TgROP18-GFP的構(gòu)建
        2.3.3 轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)的構(gòu)建及篩選
        2.3.4 轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)的鑒定
        2.3.5 TgROP18在轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)的定位分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 表達(dá)TGROP18的轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)的表型研究
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)在細(xì)胞中的生長(zhǎng)周期縮短
        3.3.2 轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)的表型發(fā)生改變
        3.3.3 轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)的運(yùn)動(dòng)能力未發(fā)生改變
        3.3.4 轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)的滑行運(yùn)動(dòng)能力未發(fā)生改變
        3.3.5 轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)入侵細(xì)胞的能力未發(fā)生改變
        3.3.6 轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)在細(xì)胞內(nèi)的增殖能力增強(qiáng)
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 轉(zhuǎn)基因表達(dá)TGROP18對(duì)新孢子蟲(chóng)毒力的影響
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)對(duì)小鼠的毒力顯著增強(qiáng)
        4.3.2 轉(zhuǎn)基因表達(dá)的TgROP18阻止IRGs向轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)的PVM募集
        4.3.3 轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)可以磷酸化IRGs
        4.3.4 轉(zhuǎn)基因新孢子蟲(chóng)中NcROP5可能發(fā)揮調(diào)控TgROP18的作用
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3466611