發(fā)布時(shí)間：2021-10-27 11:19

　　水牛（Bubalus bubalis）是我國南方亞熱帶地區(qū)最重要的乳肉兼用型大家畜,是一種優(yōu)良的種質(zhì)資源。但是,水牛的繁殖效率較低,其中精子受精過程障礙是造成低受精率的重要因素。與體細(xì)胞不同,精子是高度特異分化的細(xì)胞,成熟精子的基因轉(zhuǎn)錄和翻譯過程幾乎處于沉默狀態(tài)。精子獲能是成功受精的先決條件,主要依賴于蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和翻譯后修飾來實(shí)現(xiàn)。蛋白質(zhì)組學(xué)已被廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物精子發(fā)育和成熟研究,已發(fā)現(xiàn)了一批與精子獲能有關(guān)的特殊蛋白質(zhì)和酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì),但在水牛生殖生物學(xué)研究領(lǐng)域尚未見報(bào)道。為了更好的了解水牛精子獲能的潛在機(jī)制,本研究通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)探索水牛精子蛋白質(zhì)在獲能前后的動(dòng)態(tài)變化,從蛋白質(zhì)表達(dá)和翻譯后修飾的角度分析影響精子獲能的因素,為水牛生殖機(jī)理研究提供新的視角。本文的主要研究結(jié)果如下所示:一、水牛精子獲能前后的定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析。使用TMT（Tandem Mass Tag）標(biāo)記結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）的策略對精子獲能前后的蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行定量分析。結(jié)果顯示,共鑒定1441個(gè)蛋白質(zhì),以未獲能精子組作為對照組,獲能精子組作為實(shí)驗(yàn)組,共得到差異表達(dá)蛋白質(zhì)93個(gè)（差異倍數(shù)&g... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１精子生成的調(diào)控

學(xué)位論文水牛精子獲能前后蛋白質(zhì)組的測定及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ??證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，不同樣品之間應(yīng)使用相同質(zhì)量的蛋白質(zhì)進(jìn)質(zhì)濃度進(jìn)行測定（ＢＣＡ法）。首先按照操作說明制作蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲，注意最多只能去除兩個(gè)，不然說明測定不準(zhǔn)確，需重新測定。光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找到對應(yīng)的值即為對應(yīng)的蛋白質(zhì)濃度值。數(shù)Ｒ２＝０．９９６９，說明標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性良好，符合實(shí)驗(yàn)要求。??照組樣品與實(shí)驗(yàn)組樣品（各２０昭）進(jìn)行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，如圖１－樣品條帶清晰均一，分離效果較好，可進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。隨后，觀察酶解效果，將酶解后的樣品進(jìn)行同樣的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，卜３中Ｃ、Ｄ所示，兩組樣品均只在底部檢測到有條帶存在，說明效果良好，可繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。??ｙ－０．７５５８ｘ－０．１５２??０■?６???＝?０．９９６９??

此需對蛋白質(zhì)濃度進(jìn)行測定（ＢＣＡ法）。首先按照操作說明制作蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，去除??偏差較大的點(diǎn)，注意最多只能去除兩個(gè)，不然說明測定不準(zhǔn)確，需重新測定。然后測定??待測樣品的吸光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找到對應(yīng)的值即為對應(yīng)的蛋白質(zhì)濃度值。如圖１－２??所示，回歸系數(shù)Ｒ２＝０．９９６９，說明標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性良好，符合實(shí)驗(yàn)要求。??分別取對照組樣品與實(shí)驗(yàn)組樣品（各２０昭）進(jìn)行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，如圖１－３中Ａ、??Ｂ所示，兩組樣品條帶清晰均一，分離效果較好，可進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。隨后，蛋白質(zhì)被??酶解后，為了觀察酶解效果，將酶解后的樣品進(jìn)行同樣的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，上樣量為??２０明，如圖卜３中Ｃ、Ｄ所示，兩組樣品均只在底部檢測到有條帶存在，說明蛋白質(zhì)酶??解完全，酶解效果良好，可繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。??ｙ－０．７５５８ｘ－０．１５２??０■?６???＝?０．９９６９??Ｏｌｏ?????ａ?４??－／＾―???１?一??竺奴３?？濃嗖??崁ａ２????——線性（濃度）??＞?０．２?ａ?４?ａ?６?ａｓ?ｉ??七１?＾???圖１－２蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線??Ｆｉｇｕｒｅ?１?－２?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｉｎ??Ｍ?Ａ?Ｂ?Ｃ?Ｄ??２５０ＫＤ－＞｜ｐｓａ｜?ＷＢＢ??７５??５０?）?■■??２５＾??２〇＋?漏??Ｘ５?－＞??ｉｏ?＋?＿｜＿Ｋ冒??圖１－３獲能前與獲能后精子蛋白質(zhì)和酶解肽段的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳圖（Ｍ：蛋白ｍａｒｋｅｒ，?Ａ：獲能??精子蛋白質(zhì)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]可溶性腺苷酸環(huán)化酶介導(dǎo)的信號(hào)通路在精子獲能中的研究進(jìn)展[J]. 游愛平,王芬,劉岑,伍克佳.  中國婦幼保健. 2017(04)
[2]精子發(fā)生過程中組蛋白甲基化和乙�；痆J]. 葛少欽,李建忠,張曉靜.  遺傳. 2011(09)
[3]天冬氨酸作為非特異性吸附抑制劑在二氧化鈦選擇性富集磷酸肽中的應(yīng)用[J]. 遲明,畢煒,盧莊,宋麗娜,賈偉,張養(yǎng)軍,錢小紅,蔡耘.  色譜. 2010(02)

博士論文
[1]上海市典型環(huán)境介質(zhì)中精神藥物污染特性及吸附機(jī)理研究[D]. 向甲甲.上海大學(xué) 2018
[2]水牛生殖細(xì)胞蛋白質(zhì)組表達(dá)譜構(gòu)建和定量差異分析[D]. 付強(qiáng).廣西大學(xué) 2016

碩士論文
[1]梅山豬和杜洛克豬精子活力和蛋白磷酸化比較研究[D]. 胡啟蒙.上海交通大學(xué) 2014
[2]中草藥飼料添加劑對公兔生殖機(jī)能的影響[D]. 丁海榮.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2006
[3]羊駝人工采精技術(shù)的建立及精液品質(zhì)評價(jià)[D]. 陳明華.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3461494