當(dāng)代，隨著養(yǎng)鹿產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，鹿肉在歐洲很多國(guó)家已成為一種餐桌食品，但在一些東南亞國(guó)家例如中國(guó)、日本等，人們更注重的是鹿茸的價(jià)值。鹿茸在中醫(yī)藥學(xué)中具有提高機(jī)體免疫力、抗衰老、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合和骨質(zhì)修復(fù)等作用，被廣泛的用于治療或滋補(bǔ)。鹿茸是哺乳動(dòng)物中唯一能周期性完全再生的附屬器官，是研究哺乳動(dòng)物器官修復(fù)及再生的絕佳生物模型。鹿茸的再生源于生茸干細(xì)胞，最快生長(zhǎng)速度可以達(dá)到1～2cm/d，媲美癌細(xì)胞，但高速的生長(zhǎng)并未使鹿茸發(fā)生癌變，這為癌癥的研究提供了新的醫(yī)學(xué)模型。Galectin-1（半乳糖凝集素1）分子量約為14kDa，是一種糖結(jié)合蛋白，動(dòng)物凝集素家族的成員之一。Galectin-1（Gal-1）與神經(jīng)修復(fù)、血管再生、軟骨形成等多個(gè)生物過(guò)程相關(guān)，現(xiàn)階段對(duì)它的研究主要集中在癌變過(guò)程中，也有其在胚胎發(fā)育過(guò)程中的研究報(bào)道。鹿茸的再生過(guò)程涉及了神經(jīng)、血管、軟骨、皮膚等的生長(zhǎng)，研究表明，Gal-1在生茸干細(xì)胞中的表達(dá)量與普通細(xì)胞中的不同，在兩種生茸干細(xì)胞之中的表達(dá)量也不相同。令人感興趣的是，Gal-1在生茸干細(xì)胞中的大量表達(dá)并未引起鹿茸的癌變，也就是說(shuō)，研究Gal-1在鹿茸再生機(jī)制中的作用十分重要的。... 

【文章來(lái)源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
英文縮略表
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 研究背景
        1.2.1 鹿茸的發(fā)生
        1.2.2 鹿茸的再生
        1.2.3 Galectin-1 的生物學(xué)特性與功能
        1.2.4 鹿茸干細(xì)胞中的 Galectin-1
    1.3 研究的目的及意義
    1.4 研究?jī)?nèi)容
第2章 GAL-1 基因重組慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.2 主要試劑配制
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        2.1.4 慢病毒系統(tǒng)
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 東北梅花鹿 Gal-1 基因 RNAi 靶位點(diǎn)的篩選
        2.2.2 shRNA 寡核苷酸鏈
        2.2.3 shRNA 退火
        2.2.4 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.5 載體質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化、小搖
        2.2.6 載體質(zhì)粒 DNA 的小量提取
        2.2.7 載體質(zhì)粒的酶切
        2.2.8 載體質(zhì)粒 DNA 片段的膠回收
        2.2.9 重組片段的連接、轉(zhuǎn)化及小量提取
        2.2.10 重組載體質(zhì)粒的鑒定
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 shRNA 寡核苷酸鏈退火結(jié)果
        2.3.2 載體質(zhì)粒的酶切結(jié)果
        2.3.3 重組 pLVTHM 的 PCR 鑒定結(jié)果
        2.3.4 重組質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第3章 重組慢病毒的獲得
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.3.2 主要試劑配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 psPAX2 的酶切鑒定
        3.3.2 慢病毒三質(zhì)粒的無(wú)內(nèi)毒素大量提取
        3.3.3 復(fù)蘇 293t 細(xì)胞
        3.3.4 293t 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        3.3.5 重組慢病毒的包裝
        3.3.6 病毒的收集、濃縮
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 psPAX2 酶切鑒定結(jié)果
        3.4.2 病毒包裝結(jié)果
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第4章 生茸區(qū)骨膜干細(xì)胞原代培養(yǎng)及重組慢病毒的感染
    4.1 實(shí)驗(yàn)耗材
    4.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)步驟
        4.3.1 生茸區(qū)骨膜干細(xì)胞原代培養(yǎng)
        4.3.2 生茸區(qū)骨膜干細(xì)胞的傳代及凍存
        4.3.3 病毒感染生茸區(qū)骨膜干細(xì)胞
        4.3.4 提取細(xì)胞總 RNA
        4.3.5 RT-PCR 反應(yīng)
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 原代培養(yǎng)結(jié)果
        4.4.2 感染結(jié)果
        4.4.3 RT-PCR 檢測(cè)結(jié)果
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3461330