豬流行性腹瀉（PED）由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起,臨床上以豬的嘔吐、腹瀉和脫水為主要特征的急性接觸性腸道傳染病,對(duì)哺乳仔豬的致死率可達(dá)100%,給當(dāng)前我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。2010年以來(lái),該病的發(fā)病率明顯升高,在免疫豬場(chǎng)也有發(fā)病報(bào)道,發(fā)病仔豬以腹瀉、嘔吐和脫水為主要特征,死亡率達(dá)80%以上,嚴(yán)重影響我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。為了解我國(guó)新發(fā)疾病的病原及其主要基因的特征,作者對(duì)我國(guó)華中、華南和西南等地區(qū)12個(gè)省市的13個(gè)流行毒株的主要基因即S基因、M基因和ORF3基因進(jìn)行了測(cè)序和序列分析。其中,S蛋白介導(dǎo)病毒與細(xì)胞的吸附和融合,并能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生中和抗體；M蛋白是病毒含量最高的蛋白,是跨膜蛋白,在病毒裝配及出芽過(guò)程中發(fā)揮重要的作用,該蛋白也是PEDV刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體保護(hù)的重要結(jié)構(gòu)蛋白之一；ORF3基因所編碼的蛋白為一種跨膜蛋白,該蛋白具有離子通道活性,并與病毒毒力相關(guān)。參考GenBank中登錄的CV777全基因組序列（AF353511.1）,本研究設(shè)計(jì)擴(kuò)增PEDV S基因、ORF3基因和M基因的引物。通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件,分別建立了S基因、ORF3基因和M基因全長(zhǎng)擴(kuò)增的RT-PCR... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
1 豬流行性腹瀉研究進(jìn)展
    1.1 豬流行性腹瀉病毒
    1.2 豬流行性腹瀉流行情況
    1.3 豬流行性腹瀉病毒S基因的研究進(jìn)展
    1.4 豬流行性腹瀉病毒M基因的研究進(jìn)展
    1.5 豬流行性腹瀉病毒ORF3基因的研究進(jìn)展
    1.6 豬流行性腹瀉診斷方法研究概況
2 研究的目的及意義
3 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 病料
        3.1.2 試劑
        3.1.3 所需主要實(shí)驗(yàn)器材
        3.1.4 主要溶液及緩沖液的配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
        3.2.2 樣品處理
        3.2.3 總RNA的提取
        3.2.4 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        3.2.5 PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系及反應(yīng)條件
        3.2.6 PCR產(chǎn)物的回收與純化
        3.2.7 PCR產(chǎn)物與pMD18-T載體的連接
        3.2.8 感受態(tài)的制備(氯化鈣法)
        3.2.9 轉(zhuǎn)化
        3.2.10 質(zhì)粒的小量制備
        3.2.11 質(zhì)粒的PCR鑒定
        3.2.12 序列測(cè)定
        3.2.13 序列分析
4 結(jié)果與分析
    4.1 S基因、M基因和ORF3基因的擴(kuò)增結(jié)果
    4.2 質(zhì)粒的鑒定、測(cè)序及序列拼接
    4.3 S基因的測(cè)序結(jié)果及分析
        4.3.1 S基因的分子特征分析
        4.3.2 S基因的同源性分析
        4.3.3 S基因的分子進(jìn)化分析
    4.4 M基因的測(cè)序結(jié)果及分析
        4.4.1 M基因的分子特征分析
        4.4.2 M基因的同源性分析
        4.4.3 M基因的分子進(jìn)化分析
        4.4.4 PEDV M蛋白的跨膜區(qū)分析
    4.5 ORF3基因的測(cè)序結(jié)果及分析
        4.5.1 ORF3基因的分子特征分析
        4.5.2 ORF3基因的同源性分析
        4.5.3 ORF3基因的分子進(jìn)化分析
        4.5.4 PEDV ORF3蛋白的跨膜區(qū)分析
5 討論
    5.1 PEDV S基因
    5.2 PEDV M基因
    5.3 PEDV ORF3基因
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄1
    附錄2
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬病毒性腹瀉分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 劉云波,趙洪翠,王志成,武剛,何啟蓋.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2013(02)
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[3]2011年福建省豬流行性腹瀉的流行特點(diǎn)及其防治措施[J]. 張世忠,江斌.  福建畜牧獸醫(yī). 2012(02)
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[10]豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒和豬A群輪狀病毒多重RT-PCR檢測(cè)方法的建立及臨床應(yīng)用[J]. 張坤,何啟蓋.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(08)

碩士論文
[1]豬病毒性腹瀉多重RT-PCR診斷方法的建立和應(yīng)用及豬輪狀病毒的分離[D]. 張坤.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]豬流行性腹瀉病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因的克隆與特征分析[D]. 楊敏.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3461323