lncRNA THOR被證實在多種癌癥及哺乳動物睪丸中表達,又被稱為癌/睪丸（Cancer/testis）lncRNA。THOR基因位于染色體2q14.2處,有三個外顯子,總長度為3.465 kb。研究表明,THOR基因在雄性生殖中有重要的作用,但目前尚缺少哺乳動物模型支持該理論研究。關(guān)于THOR在雄性生育力中的作用機制需要進一步闡明。此外,已有研究表明lncRNA上的m6A甲基化修飾在腫瘤進程中發(fā)揮重要作用,并且THOR的互作蛋白IGF2BP1是m6A識別蛋白IGF2BPs中的一員。但THOR的致癌作用是否與m6A相關(guān)尚無研究報道。因此,本論文通過構(gòu)建lncRNA THOR基因敲除小鼠、家兔模型,探討其對哺乳動物生殖能力影響的分子機理。并通過構(gòu)建lncRNA THOR和METTL3基因敲除的H1299細胞系,闡述m6A甲基化修飾對lncRNA THOR促進細胞增殖的調(diào)節(jié)作用。首先,利用CRISPR/Cas9技術(shù),成功構(gòu)建THOR基因敲除小鼠和家兔模型。經(jīng)PCR擴增、Sanger測序、qRT-PCR結(jié)果顯示,THOR基因敲除小鼠和家兔模型均為全長缺失個體。同時Sanger測序及T7EI... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

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CRISPR/Cas系統(tǒng)的簡史[2]

第一篇綜述第1章CRISPR/Cas系統(tǒng)所介導(dǎo)的基因編輯技術(shù)的研究進展5Ⅲ的作用下加工成成熟的CRISPRRNA(crRNA)，每個都包含間隔子序列和側(cè)翼重復(fù)的部分。在切割(或者效應(yīng))區(qū)域中參與靶標識別和核酸切割，在此過程中Cas蛋白和成熟的crRNA核糖核蛋白復(fù)合物(Ribonucleoproteincomplex，RNP)該復(fù)合物通過crRNA和靶核酸的堿基配對識別并切割入侵的外源DNA(或RNA)。圖1.2CRISPR/Cas系統(tǒng)的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)[3]Figure1.2OverviewofadaptiveimmunitybyCRISPR/Cassystems[3]1.3CRISPR/Cas系統(tǒng)的組成和分類隨著研究的深入，近年來越來越多的CRISPR/Cas系統(tǒng)和Cas蛋白被發(fā)現(xiàn)，根據(jù)針對CRISPR/Cas類型和亞型的特征基因鑒定，基因庫和基因組基因座組織

吉林大學(xué)博士學(xué)位論文6的比較，以及基于序列相似性的聚類和對CRISPR/Cas系統(tǒng)不同亞型中保守的基因的系統(tǒng)發(fā)育分析等方法對CRISPR/Cas系統(tǒng)進行分類。因此，得到了兩大類CRISPR/Cas系統(tǒng)(Class1和Class2)(圖1.3)[1]。圖1.31類和2類CRISPR/Cas基因座的通用結(jié)構(gòu)[1]Figure1.3ThetwoclassesofCRISPR/Cassystems[1]1.3.1Class1-CRISPR/Cas系統(tǒng)在1類CRISPR/Cas系統(tǒng)中，主要包括Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型CRISPR/Cas系統(tǒng)(圖1.4)[1]。1.3.1.1Ⅰ型Ⅰ型CRISPR/Cas系統(tǒng)中，采用的是稱為CRISPR相關(guān)復(fù)合物的多亞基核糖核蛋白復(fù)合物進行抗病毒防御(級聯(lián)式)，以進行目標DNA識別和切割[4]，根據(jù)其效應(yīng)復(fù)合體的主要成分區(qū)別，將其分為ⅠA到E和ⅠF1到3以及ⅠG共十種亞型，其中ⅠA亞型的效應(yīng)復(fù)合體主要由cas11(csa5)、cas7、cas5和cas8a1組成；ⅠB亞型的效應(yīng)復(fù)合體主要由cas8b1、cas7和cas5；ⅠC亞型的效應(yīng)復(fù)合體主要由cas5、cas8c和cas7；ⅠG亞型的效應(yīng)復(fù)合體主要由cas8u2、cas7和GSU0054(cas5和cas6)；ⅠD亞型的效應(yīng)復(fù)合體主要由cas3’’-cas10d、cas7(cas2)、cas5和cas6；ⅠE亞型的效應(yīng)復(fù)合體主要由cas8e(cas1)、cas11(cse2)、cas7、cas5和cas6；ⅠF1亞型的效應(yīng)復(fù)合體主要由cas8f1(csy1)、cas5f1(csy2)、cas7f1(csy3)和cas6f；ⅠF2亞型的效應(yīng)復(fù)合體主要由cas7f2(PBPRB1993)、cas5f2(PBPRB1992)和cas6f；ⅠF3亞型的效應(yīng)復(fù)合體主要由cas8f3/cas5f3、cas7f3和cas6f。1.3.1.2Ⅲ型Ⅲ型CRISPR/Cas系統(tǒng)中，較為不同的是環(huán)狀寡核苷酸(cOA)信號通路協(xié)同其效應(yīng)復(fù)合體和CARF(CRISPR-associatedRossmannfold)域核糖核酸酶(Csm6/Csx1家族)來發(fā)揮作用[5-9]，根據(jù)其效應(yīng)復(fù)合體的主要成分區(qū)別，將其分為ⅢA、D、E、F、C和B三種亞型，其中ⅢA亞型的效應(yīng)復(fù)合體主要由cas10、

【參考文獻】：
期刊論文
[1]N6 -methyl-adenosine （m6 A） in RNA: An Old Modification with A Novel Epigenetic Function[J]. Yamei Niu,Xu Zhao,Yong-Sheng Wu,Ming-Ming Li,Xiu-Jie Wang,Yun-Gui Yang.  Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2013(01)



本文編號：3456178