豬偽狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）是一種α皰疹病毒,能夠引起多種動物及家畜以發(fā)熱、奇癢（豬只除外）和腦炎等為主要特征的傳染病。2011年以來,我國出現(xiàn)了PRV變異毒株,與經(jīng)典毒株相比,該毒株能導(dǎo)致更嚴(yán)重的發(fā)熱、病理損傷和更高的致死率。皰疹病毒感染能夠激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,后者通過啟動未折疊蛋白反應(yīng)（UPR）不同程度地激活下游的蛋白質(zhì)降解、自噬、炎癥反應(yīng)等生物學(xué)過程。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作為機(jī)體內(nèi)的一種防御機(jī)制,可以介導(dǎo)多種病毒感染所誘發(fā)炎癥反應(yīng),如其所激活的UPR會通過其下游轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控多種炎性因子的表達(dá),以達(dá)到宿主清除病原體的目的。而過度的炎性因子表達(dá)會誘使宿主發(fā)生免疫損傷或嚴(yán)重的發(fā)熱發(fā)病現(xiàn)象。那么,PRV變異毒株感染引起的更強(qiáng)的發(fā)熱和病理損傷的機(jī)制是什么?是否是由于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激所介導(dǎo)炎癥反應(yīng)造成的?為了回答這一問題,本研究對PRV經(jīng)典毒株與變異毒株激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激調(diào)控炎性因子表達(dá)的分子機(jī)制進(jìn)行了研究。為探究PRV感染宿主細(xì)胞后是否能夠誘發(fā)炎性因子的表達(dá),本研究通過熒光定量PCR的方法,檢測了病毒感染PK-15細(xì)胞3、6、12、24、36 h后IL-6、IL-8、TNF-α的... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

皰疹病毒與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)系示意圖

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第一章緒論11圖1-2ERStress誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)示意圖Fig.1-2ModelforERStress-mediatedinflammatoryresponse1.5研究目的與意義目前，偽狂犬病在我國仍廣泛流行，對我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展存在較嚴(yán)重的威脅，對于偽狂犬病毒的研究仍是國際病毒學(xué)領(lǐng)域研究的熱點之一。從上世紀(jì)九十年代起，由于疫苗株Bartha-K61的使用，偽狂犬病在我國得到了有效的防控。然而自2011年以來，在我國多個被免疫過的養(yǎng)豬場相繼爆發(fā)偽狂犬病，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失�？茖W(xué)家們表明再次爆發(fā)的偽狂犬病是由PRV變異毒株引起的，并對其流行病學(xué)、生物學(xué)特性展開了深入的研究工作(Anetal.,2013;Luoetal.,2014;Tong,etal.,2015;Yeetal.,2015)。本實驗室在探究變異毒株JS-2012抗原變異程度、致病能力的過程中發(fā)現(xiàn)PRV變異毒株感染動物后表現(xiàn)出比傳統(tǒng)的經(jīng)典毒株更嚴(yán)重的發(fā)熱現(xiàn)象和病理損傷，原始疫苗不能夠提供完全的保護(hù)效力(Tongetal.,2016)�；诖�，我們想要探究變異毒株毒力增強(qiáng)及誘發(fā)嚴(yán)重的發(fā)熱發(fā)病現(xiàn)象的分子機(jī)制。相比于其他囊膜病毒，PRV囊膜表面含有多達(dá)11個糖蛋白，其合成、修飾、折疊的過程主要發(fā)生在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，且病毒從潛伏狀態(tài)被激活后，大量的立即早期基因表達(dá)激活轉(zhuǎn)錄級聯(lián)反應(yīng)的過程都可能會同其他皰疹病毒一樣誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，但是目前關(guān)于PRV感染能否能夠誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激僅有極少量的報道，不同PRV毒株是否能夠不同程度地調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否能夠介導(dǎo)PRV誘發(fā)炎性因子風(fēng)暴及其背后的分子機(jī)制尚不明確。因此探究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在PRV感染中的作用，強(qiáng)弱毒株如何差異化調(diào)控UPR以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在PRV感染誘發(fā)的炎癥反應(yīng)的作用對于我們探究PRV變異毒株毒力增強(qiáng)及導(dǎo)致更嚴(yán)重的病理損傷的原因具有重要意義，該研究闡明的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)PRV變異毒株?

曖輾⒌難仔砸蜃擁鞍姿?降謀澩锪懇蠶災(zāi)?哂誥?潿局輳?得鱌RV變異毒株在病毒感染晚期能夠更高水平地激活多種炎性因子的表達(dá)（圖3-1D、E、F）。為了進(jìn)一步確認(rèn)兩種毒株的炎性因子水平差異并非是復(fù)制速率不同造成的，因此本研究在不同時間點對病毒的生長曲線進(jìn)行了檢測，結(jié)果顯示二者的在各個時間點均無顯著性差異，且兩種毒株均在24小時達(dá)到復(fù)制最高點，說明炎性因子表達(dá)的水平差異并非是復(fù)制速率不同造成的，而是由病毒本身的差異所導(dǎo)致的（圖3-2）。上述結(jié)果顯示，PRV變異毒株在病毒感染晚期高水平地激活炎性因子表達(dá)。圖3-1PRV激活炎性因子結(jié)果A：PRV經(jīng)典毒株SC與變異毒株JS-2012感染各時間點后IL-6mRNA水平的表達(dá)量；B：PRV經(jīng)典毒株SC與變異毒株JS-2012感染各時間點后IL-8mRNA水平的表達(dá)量；C：PRV經(jīng)典毒株SC與變異毒株JS-2012感染各時間點后TNF-αmRNA水平表達(dá)量；D：PRV經(jīng)典毒株SC與變異毒株JS-2012感染36h后IL-6蛋白水平的表達(dá)量；E：PRV經(jīng)典毒株SC與變異毒株JS-2012感染36h后IL-8蛋白水平的表達(dá)量；F：PRV經(jīng)典毒株SC與變異毒株JS-2012感染36h后TNF-α蛋白水平表達(dá)量

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]偽狂犬病毒主要毒力基因的研究進(jìn)展[J]. 任衛(wèi)科,池晶晶,李秀麗,鄢明華,張莉.  畜牧獸醫(yī)科學(xué)(電子版). 2017(08)
[2]免疫后發(fā)病仔豬中偽狂犬病毒的分離和鑒定[J]. 童武,張青占,鄭浩,劉飛,姜一峰,單同領(lǐng),周艷君,童光志.  中國動物傳染病學(xué)報. 2013(03)



本文編號：3455148