小反芻獸疫病毒（peste des petits ruminants virus,PPRV）作為副黏病毒科麻疹病毒屬的一個(gè)重要組成成員,在臨床上能夠引起野生和家養(yǎng)小反芻動(dòng)物發(fā)病,以高熱,肺炎,腹瀉和呼吸道黏膜炎癥為主要特征。PPRV屬于有囊膜的單股負(fù)鏈RNA病毒,基因組大小為15948nt,編碼8個(gè)蛋白（N,P,C,V,M,F,HN和L）。動(dòng)物細(xì)胞系是病毒基礎(chǔ)研究和應(yīng)用的主要平臺(tái)之一。然而,有許多病毒因缺乏能支持其穩(wěn)定增殖的細(xì)胞系,例如PPRV和RHDV等。而導(dǎo)致其相關(guān)基礎(chǔ)和應(yīng)用研究工作進(jìn)展十分緩慢。為解決該技術(shù)瓶頸,原代細(xì)胞的永生化技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。本研究旨在構(gòu)建一株能穩(wěn)定支持PPRV增殖的羊源永生化細(xì)胞系。首先,構(gòu)建了pLOV-puro-hTERT重組質(zhì)粒,然后利用慢病毒包裝系統(tǒng),從293T細(xì)胞中拯救出重組慢病毒并感染原代綿羊肺成纖維細(xì)胞,在感染48h后,用嘌呤霉素連續(xù)加壓,篩選出具有抗性的存活細(xì)胞,將其擴(kuò)增并連續(xù)傳代至第10代,分別用分子生物學(xué)和年醫(yī)學(xué)方法鑒定以后,最終獲得了永生化原代綿羊肺成纖維細(xì)胞系,并將其命名為SLT細(xì)胞系。遺憾的是,RT-PCR和WB結(jié)果顯示SLT細(xì)胞系可以支... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PPRV粒子的模式結(jié)構(gòu)(Amjadetal.,1996;Banyardetal.,2010)

染 PPRV(Amjad, et al., 1996; Brindha et al., 2001)。1.3 PPR 臨床癥狀和組織病理學(xué)PPRV 主要的易感部位是呼吸道和消化道黏膜。口腔炎肺腸炎混合感染，組織病理學(xué)損傷在這些部位中表現(xiàn)明顯。除了常見的肺炎外，可能發(fā)生間質(zhì)性化膿性肺炎，在嘴唇周圍有硬痂，臨床癥狀和病理學(xué)損傷類似于牛瘟(Al-Dubaib, 2009)。臨床上將 PPRV 給易感宿主造成的危害程度劃分為 4 個(gè)等級：最急性型、急性型、亞急性型和亞臨床型，主要表現(xiàn)為急性型感染(Nawathe and Taylor, 1979)。PPRV 首先在局部淋巴結(jié)中增殖并導(dǎo)致病毒血癥，然后感染周圍敏感的上皮組織，引起肉眼可見的細(xì)胞病變和病理學(xué)損傷。PPR 的特征性病變?yōu)椤鞍唏R線”的出現(xiàn)，主要是由于盲腸，結(jié)腸近端和直腸嚴(yán)重阻塞的結(jié)果(Taylor et al., 2002)。該病除了造成病毒血癥外，在口腔和腸黏膜中的組織中形成多核的合胞體，痊愈的動(dòng)物會(huì)獲得較強(qiáng)的免疫力，不存在慢性和恢復(fù)期帶毒的狀態(tài)。值得注意的是，PPRV 抗原在山羊和綿羊的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中存在但不產(chǎn)生任何神經(jīng)癥狀(Kul et al., 2007)。1.4 PPRV 的基因組結(jié)構(gòu)及蛋白功能

業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言包繞的螺旋狀結(jié)構(gòu)。在副黏病毒科中 P 與 L 交互序列是保守的(Chard et al., 2008)。PPRV 的復(fù)制周期同的麻疹病毒具有相似的復(fù)制循環(huán)過程，第一步都是通過病毒通過與細(xì)胞膜受體連接融合從而將病毒基因組釋放入細(xì)胞質(zhì)(Moss and Griffin, 2006)。H 蛋白負(fù)責(zé)識(shí)別宿主細(xì)受體分子（唾液酸，淋巴細(xì)胞信號(hào)激活分子 SLAM/CD150(Adombi et al., 2011b; Seki et3a)，上皮細(xì)胞受體分子 Nectin-4(Birch, et al., 2013)）并將病毒與細(xì)胞連接。將病毒與細(xì)胞連接。H 蛋白與細(xì)胞受體連接后可激活 F 蛋白融合活性。


本文編號(hào)：3451454