為研究黃芪總黃酮（TFA）對巨噬細胞RAW264.7的抗炎免疫雙向調(diào)節(jié)作用,本研究首先采用MTT法篩選TFA對RAW264.7細胞的安全劑量;后續(xù)研究均采用以下兩種方式開展:采用不同安全劑量（10μg/mL、25μg/mL、100μg/mL）的TFA與正常培養(yǎng)的RAW264.7細胞作用;上述不同濃度的TFA與RAW264.7細胞作用后以終濃度為1μg/mL LPS刺激。分別通過ELISA和RT-PCR檢測上述兩種情況下RAW264.7細胞中細胞因子的含量及其mRNA的轉(zhuǎn)錄水平;采用western blot測定上述兩種情況下RAW264.7細胞NF-κB信號通路中關(guān)鍵蛋白的表達水平。結(jié)果顯示,TFA在0～150μg/mL對細胞無明顯毒性;ELISA和RT-PCR結(jié)果顯示,TFA能夠顯著提高正常培養(yǎng)的RAW264.7細胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α含量及其mRNA轉(zhuǎn)錄水平,抑制LPS刺激的RAW264.7細胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α的過度表達及其mRNA水平的過度轉(zhuǎn)錄,并呈劑量依賴性;western blot結(jié)果表明,TFA能夠顯著下調(diào)正常培養(yǎng)的RAW264.7... 

【文章來源】：中國預防獸醫(yī)學報. 2020,42(08)北大核心CSCD

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不同濃度TFA對RAW264.7細胞活性影響的檢測結(jié)果

圖2 TFA對正常培養(yǎng)的RAW264.7細胞IL-1β、IL-6和TNF-α含量影響的檢測結(jié)果2.4 TFA對正常培養(yǎng)的RAW264.7細胞各細胞因子轉(zhuǎn)錄水平影響的檢測結(jié)果

通過RT-PCR法檢測TFA對LPS刺激的RAW264.7細胞各細胞因子mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，并經(jīng)Quantity one軟件進行條帶灰度分析。結(jié)果顯示，與空白組對照相比，LPS刺激導致RAW264.7細胞IL-1β、IL-6及TNF-αm RNA轉(zhuǎn)錄水平急劇增高（p<0.01），而25μg/mL和100μg/mL TFA極顯著抑制了LPS刺激的IL-1βmRNA轉(zhuǎn)錄水平（p<0.01）；各劑量TFA顯著和極顯著抑制了LPS刺激的IL-6 m RNA轉(zhuǎn)錄水平（p<0.05;p<0.01);25μg/mL和100μg/mL TFA顯著和極顯著抑制了LPS刺激的TNF-αmRNA轉(zhuǎn)錄水平（p<0.05;p<0.01）（圖5）。表明TFA能夠抑制LPS刺激的RAW264.7細胞IL-1β、IL-6及TNF-αmRNA的轉(zhuǎn)錄水平，且呈一定的劑量依賴關(guān)系。圖5 TFA對LPS刺激的RAW264.7細胞IL-1β、IL-6和TNF-αm RNA轉(zhuǎn)錄水平影響的檢測結(jié)果

【參考文獻】：
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