犬細(xì)小病毒（Canine parvovirus,CPV）自1978年發(fā)現(xiàn)以來(lái),在全世界迅速傳播并嚴(yán)重威脅著養(yǎng)犬業(yè)的發(fā)展�？蓪�(dǎo)致犬急性出血性腸炎和心肌炎,是發(fā)病率最高的犬病原體之一。目前許多血清學(xué)和分子試驗(yàn)都可用于此疾病的準(zhǔn)確診斷,適當(dāng)?shù)呐R床治療也可使患犬迅速痊愈,而接種疫苗始終是控制此病的最佳策略。盡管普遍用于免疫的犬細(xì)小弱毒疫苗在預(yù)防感染上是非常有效的,但其安全問(wèn)題始終令人擔(dān)憂,然而尚未有新型疫苗批準(zhǔn)上市,因此急需開(kāi)發(fā)一種安全有效的替代疫苗。病毒樣顆粒（virus-like particles,VLPs）是由病毒衣殼蛋白自行裝配的蛋白顆粒,因其缺少病毒DNA所以不具備宿主體內(nèi)復(fù)制的能力。本實(shí)驗(yàn)利用大腸桿菌以低廉的成本獲得了大量具有活性的重組VP2蛋白,此蛋白可自行裝配成免疫原性良好的VLPs,主要分為以下三個(gè)部分:1.人工合成CPV VP2蛋白全長(zhǎng)基因,構(gòu)建表達(dá)載體pET30a-VP2后與伴侶蛋白質(zhì)粒pTf16共轉(zhuǎn)入BL21進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明已成功構(gòu)建了VP2重組表達(dá)載體,對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE分析,可見(jiàn)大小約為70 kDa的VP2蛋白,與未轉(zhuǎn)入pTf16的... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

菌液PCR鑒定和雙酶切鑒定(a)菌液PCR鑒定.M：DL2000；1-2：JM109-pET30a-VP2；3-4：BL21-pET30a-VP2；5：陰性對(duì)照.(b)雙酶切鑒定.M：DL5000；1：空載體對(duì)照；2：陰性對(duì)照；3-4：BamHI/XhoI雙酶切JM109-pET30a-VP2

圖 2-2 VP2 蛋白的 SDS-PAGE 分析er；1：pET30a 空載體對(duì)照；2：IPTG 誘導(dǎo)前的 BL21-pET30a-VPP2 全菌；4：誘導(dǎo)后的 BL21-pET30a-VP2 上清；5:誘導(dǎo)后的 BL21阿拉伯糖和 IPTG 誘導(dǎo)前的 BL21-pET30a-VP2-Tf16；7：L 阿拉伯P2-Tf16 全菌；8：L 阿拉伯糖誘導(dǎo)后的 BL21-pET30a-VP2-Tf16 上糖誘導(dǎo)后的 BL21-pET30a-VP2-Tf16 包涵體Figure 2-2 SDS-PAGE analysis of the VP2 protein expression protein molecular weight (MW) markers; Lane 1, pET30a vector contr-VP2 cells before induction of IPTG; Lane 3, induced BL21-pET30a-VET30a-VP2 cell lysate; Lane 5, inclusion body of induced BL21-pET3ET30a-VP2-Tf16 cells before induction of IPTG and L-Arabinose; LanVP2-Tf16 cells; Lane 8, induced BL21-pET30a-VP2-Tf16 cell lysate; body of induced BL21-pET30a-VP2-Tf16 cells

3-1 Ni-NTA 純化后 VP2 蛋白的 SDS-PAGE 檢測(cè)和反應(yīng)原性后 VP2 蛋白的 SDS-PAGE 檢測(cè). M：蛋白 Marker；1：誘導(dǎo)前流穿液；4：洗液；5：洗脫液.（b）VP2 蛋白的反應(yīng)原性分析誘導(dǎo)前的全菌樣品；2：誘導(dǎo)后菌體上清；3：純化后 VP2 蛋e 3-1 SDS-PAGE analysis and reactivity analysis of purified VP2alysis of purification of VP2 protein co-expressed with chaperoneane 2, induced cells lysate; Lane 3, flow buffer; Lane 4, wash bustern-blot analysis of purified VP2 protein with an anti-CPV polytion; Lane 2, induced cell lysate; Lane3, purified VP2 protein. This approximately 70 kDa. The Tf16 is approximately 56 kDa.樣顆粒的體外組裝條件摸索集狀態(tài)可能受多種因素的影響，為了了解 pH 和 NaCl 檢測(cè)不同溶液透析后的 VP2 蛋白。首先在相同的 NaCLPs 形成的影響。如圖 3-2a 所示，在酸性條件下大部大于天然犬細(xì)小病毒的直徑（25 nm），而相比之下，，在此條件下大部分 VLPs 的直徑為 28.35 nm。所以

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]犬細(xì)小病毒VP2蛋白在家蠶/昆蟲(chóng)細(xì)胞中表達(dá)[J]. 胡桂秋,郭鶴,梁紅茹,馮昊,王化磊,鄭學(xué)星,趙永坤,趙麗麗,楊松濤,夏咸柱.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2013(07)
[2]蛋白質(zhì)分離純化方法研究進(jìn)展[J]. 吳少輝,劉光明.  中國(guó)藥業(yè). 2012(01)
[3]犬細(xì)小病毒:從起源到進(jìn)化[J]. 趙建軍,閆喜軍,吳威.  微生物學(xué)報(bào). 2011(07)
[4]中國(guó)國(guó)內(nèi)首次檢測(cè)到犬細(xì)小病毒CPV-2c[J]. 張仁舟,楊松濤,馮昊,崔萇盛,夏咸柱.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2010(04)
[5]犬細(xì)小病毒北京分離株VP2基因的表達(dá)與抗原性分析[J]. 曾妮,李剛,朱鴻飛,侯紹華,史利軍.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2010(04)
[6]犬細(xì)小病毒VP2基因的原核表達(dá)及間接ELISA方法的建立[J]. 李慕瑤,姜騫,劉家森,司昌德,韓凌霞,曲連東.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2007(03)

碩士論文
[1]犬細(xì)小病毒VP2基因的克隆、表達(dá)及其重組蛋白的抗原性研究[D]. 陳勝男.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



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