犬細小病毒（Canine parvovirus,CPV）自1978年發(fā)現(xiàn)以來,在全世界迅速傳播并嚴重威脅著養(yǎng)犬業(yè)的發(fā)展。可導致犬急性出血性腸炎和心肌炎,是發(fā)病率最高的犬病原體之一。目前許多血清學和分子試驗都可用于此疾病的準確診斷,適當?shù)呐R床治療也可使患犬迅速痊愈,而接種疫苗始終是控制此病的最佳策略。盡管普遍用于免疫的犬細小弱毒疫苗在預防感染上是非常有效的,但其安全問題始終令人擔憂,然而尚未有新型疫苗批準上市,因此急需開發(fā)一種安全有效的替代疫苗。病毒樣顆粒（virus-like particles,VLPs）是由病毒衣殼蛋白自行裝配的蛋白顆粒,因其缺少病毒DNA所以不具備宿主體內復制的能力。本實驗利用大腸桿菌以低廉的成本獲得了大量具有活性的重組VP2蛋白,此蛋白可自行裝配成免疫原性良好的VLPs,主要分為以下三個部分:1.人工合成CPV VP2蛋白全長基因,構建表達載體pET30a-VP2后與伴侶蛋白質粒pTf16共轉入BL21進行誘導表達,瓊脂糖凝膠電泳結果表明已成功構建了VP2重組表達載體,對表達產物進行SDS-PAGE分析,可見大小約為70 kDa的VP2蛋白,與未轉入pTf16的... 

【文章來源】：西北農林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

菌液PCR鑒定和雙酶切鑒定(a)菌液PCR鑒定.M：DL2000；1-2：JM109-pET30a-VP2；3-4：BL21-pET30a-VP2；5：陰性對照.(b)雙酶切鑒定.M：DL5000；1：空載體對照；2：陰性對照；3-4：BamHI/XhoI雙酶切JM109-pET30a-VP2

圖 2-2 VP2 蛋白的 SDS-PAGE 分析er；1：pET30a 空載體對照；2：IPTG 誘導前的 BL21-pET30a-VPP2 全菌；4：誘導后的 BL21-pET30a-VP2 上清；5:誘導后的 BL21阿拉伯糖和 IPTG 誘導前的 BL21-pET30a-VP2-Tf16；7：L 阿拉伯P2-Tf16 全菌；8：L 阿拉伯糖誘導后的 BL21-pET30a-VP2-Tf16 上糖誘導后的 BL21-pET30a-VP2-Tf16 包涵體Figure 2-2 SDS-PAGE analysis of the VP2 protein expression protein molecular weight (MW) markers; Lane 1, pET30a vector contr-VP2 cells before induction of IPTG; Lane 3, induced BL21-pET30a-VET30a-VP2 cell lysate; Lane 5, inclusion body of induced BL21-pET3ET30a-VP2-Tf16 cells before induction of IPTG and L-Arabinose; LanVP2-Tf16 cells; Lane 8, induced BL21-pET30a-VP2-Tf16 cell lysate; body of induced BL21-pET30a-VP2-Tf16 cells

3-1 Ni-NTA 純化后 VP2 蛋白的 SDS-PAGE 檢測和反應原性后 VP2 蛋白的 SDS-PAGE 檢測. M：蛋白 Marker；1：誘導前流穿液；4：洗液；5：洗脫液.（b）VP2 蛋白的反應原性分析誘導前的全菌樣品；2：誘導后菌體上清；3：純化后 VP2 蛋e 3-1 SDS-PAGE analysis and reactivity analysis of purified VP2alysis of purification of VP2 protein co-expressed with chaperoneane 2, induced cells lysate; Lane 3, flow buffer; Lane 4, wash bustern-blot analysis of purified VP2 protein with an anti-CPV polytion; Lane 2, induced cell lysate; Lane3, purified VP2 protein. This approximately 70 kDa. The Tf16 is approximately 56 kDa.樣顆粒的體外組裝條件摸索集狀態(tài)可能受多種因素的影響，為了了解 pH 和 NaCl 檢測不同溶液透析后的 VP2 蛋白。首先在相同的 NaCLPs 形成的影響。如圖 3-2a 所示，在酸性條件下大部大于天然犬細小病毒的直徑（25 nm），而相比之下，，在此條件下大部分 VLPs 的直徑為 28.35 nm。所以

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]犬細小病毒VP2基因的克隆、表達及其重組蛋白的抗原性研究[D]. 陳勝男.新疆農業(yè)大學 2010



本文編號：3446982