KISS1（蛋白為Kisspeptin）及其G蛋白偶聯(lián)受體54系統(tǒng)（G Protin-coupled Receptor 54,GPR54）通過下丘腦-垂體-性腺軸對動物繁殖的重要調控作用。我們前期研究表明,KISS1基因作為免疫去勢的新靶標免疫公羔后能夠顯著降低睪酮含量和阻滯睪丸發(fā)育,然而,仍不清楚其機制。激素類免疫主要通過抗體中和作用進而影響下丘腦-垂體中樞軸這個內分泌途徑發(fā)揮作用。然而,KISS1在睪丸組織表達量較其它組織高,睪丸組織間質細胞產生和分泌的睪酮對睪丸發(fā)育發(fā)揮著至關重要的作用。因此,KISS1基因免疫除了通過內分泌途徑發(fā)揮作用外,能否通過睪丸間質細胞自分泌途徑達到去勢的目的尚不明晰。本研究以大足黑山羊為研究對象,利用免疫組化、定量PCR、Western Blotting和酶免測定等技術,分析KISS1/GPR54在山羊睪丸間質細胞的表達,進一步分析Kisspeptin過表達處理對睪丸間質細胞Kisspeptin自分泌及功能的影響,闡明KISS基因免疫通過間質細胞自分泌途徑去勢的機制。本研究有望進一步提高KISS1基因疫苗免疫去勢的效果,為激素免疫調控技術在動物上的廣泛應... 

【文章來源】：西南大學重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略詞一覽表
1 文獻綜述
    1.1 kiss/gpr54研究進展
        1.1.1 kiss1簡介
        1.1.2 gpr54簡介
    1.2 kiss1/gpr54系統(tǒng)與生殖功能的關系
        1.2.1 kiss1/gpr54系統(tǒng)調控青春期的起始
        1.2.2 kiss1/gpr54系統(tǒng)刺激促性腺激素的釋放
    1.3 影響kiss1/gpr54表達的因素
        1.3.1 性腺類固醇激素對kiss1基因表達的影響
        1.3.2 季節(jié)變化對kiss1、gpr54表達的影響
        1.3.3 營養(yǎng)水平對kiss1、gpr54表達的影響
    1.4 睪丸間質細胞
        1.4.1 睪丸間質細胞形態(tài)
        1.4.2 睪丸間質細胞功能
        1.4.3 睪丸間質細胞生長發(fā)育的調控
    1.5 免疫去勢
        1.5.1 免疫去勢簡介
        1.5.2 免疫去勢機制的研究
        1.5.3 免疫去勢的應用
        1.5.4 免疫去勢存在的問題
    1.6 研究目的和意義
2 引言
3 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 試驗動物
        3.1.2 主要儀器設備
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 溶液配制
    3.2 試驗方法
        3.2.1 山羊各組織kiss1及gpr54基因定量pcr
        3.2.2 免疫組化檢測kisspeptin及gpr54在睪丸組織中表達
        3.2.3 山羊睪丸間質細胞的分離培養(yǎng)
        3.2.4 rt-pcr檢測kiss1和gpr54基因在睪丸間質細胞中的表達
        3.2.5 western blotting檢測kiss1和gpr54基因及蛋白在間質細胞的表達
        3.2.6 kisspeptin過表達處理睪丸間質細胞
        3.2.7 qrt-pcr檢測kisspeptin過表達處理對睪丸間質細胞kiss1和gpr54的mrna表達的影響
        3.2.8 elisa檢測kisspeptin過表達處理對睪丸間質細胞睪酮分泌的影響
    3.3 數(shù)據(jù)分析
4 結果與分析
    4.1 kiss1及gpr54基因在山羊不同組織的表達變化
    4.2 kisspeptin和gpr54蛋白在山羊睪丸組織的表達
    4.3 睪丸間質細胞中kiss1和gpr54表達情況
        4.3.1 山羊睪丸間質細胞形態(tài)學觀察
        4.3.2 睪丸間質細胞總rna提取純度檢測
        4.3.3 kiss1及gpr54基因在山羊睪丸間質細胞的表達
        4.3.4 kisspeptin及gpr54蛋白在山羊睪丸間質細胞中的表達
    4.4 kisspeptin不同濃度處理對間質細胞睪酮分泌的影響
    4.5 kisspeptin處理對間質細胞kiss1合成和gpr54表達的影響
    4.6 kisspeptin處理對間質細胞睪酮分泌的影響
5 討論
    5.1 山羊不同組織中kiss1及gpr54的表達差異
    5.2 kiss1及gpr54在睪丸間質細胞的合成及kisspeptin的分泌
    5.3 kisspeptin54過表達處理對山羊睪丸間質細胞kisspeptin自分泌的影響
    5.4 kisspeptin54過表達處理對山羊睪丸間質細胞睪酮分泌的影響
    5.5 kiss1/gpr54在睪丸間質細胞的自分泌對kiss1免疫去勢機制研究的影響
6 結論
    6.1 全文主要結果
    6.2 創(chuàng)新性結論
    6.3 進一步研究建議
參考文獻
致謝
參加課題及發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]大鼠睪丸間質細胞中促性腺激素釋放激素激動劑調控睪酮合成的機制[J]. 柳海燕,陶曉倩,時姍姍,張艷梅,盧坤剛,韓雪峰,崔英霞,戈一峰,黃宇烽,李曉軍,姚兵.  南京醫(yī)科大學學報(自然科學版). 2009(10)
[2]KISS-1/GPR54基因及其在生殖中的作用[J]. 馮濤,儲明星,張英杰.  遺傳. 2008(04)

博士論文
[1]KISS1基因免疫去勢效果及機制的研究[D]. 韓燕國.華中農業(yè)大學 2015



本文編號：3443315