據(jù)稱,內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒（Endogenous retroviruses,ERVs）是遠(yuǎn)古反轉(zhuǎn)錄病毒感染時(shí)留下的痕跡,構(gòu)成了機(jī)體“virome”的重要組成部分。過(guò)去對(duì)內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒的功能不夠了解,曾將其視為“垃圾DNA”（JunkDNA）。但最近有研究表明,某些內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒不僅對(duì)早期胚胎發(fā)育和胚胎干細(xì)胞的多能性具有重要作用,還可能與病毒感染、天然免疫以及抗腫瘤作用有關(guān)。本研究選擇內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒一雞內(nèi)源性白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup E,ALVE）作為研究模型,應(yīng)用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)雞1號(hào)染色體上存在的內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒ALVE1進(jìn)行去表達(dá)以探索其與天然免疫之間的關(guān)系,為進(jìn)一步研究?jī)?nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒的功能和作用奠定基礎(chǔ)。本研究通過(guò)CRISPR/Cas9技術(shù)將轉(zhuǎn)錄終止序列（SV40ployA）敲入內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒ALVE1的啟動(dòng)子區(qū),通過(guò)終止其轉(zhuǎn)錄從而實(shí)現(xiàn)ALVE1的去功能（Loss of function）。本文不僅成功構(gòu)建了針對(duì)家禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒去功能研究的新方法,還為今后研究?jī)?nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒的功能提供了新思路。主要的研究結(jié)果如下... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＣＲＩＳＰＲ系統(tǒng)結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇ．?１－１?ＣＲＩＳＰＲ?ｓｙｓｔｅｍ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ??

ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)介導(dǎo)的基因定點(diǎn)編輯技術(shù)是目前基因編輯領(lǐng)域比較熱門的方法，通過(guò)??對(duì)原始的ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)簡(jiǎn)單的改造，實(shí)現(xiàn)了在多種生物中高度靈活且特異的基因組編??輯，如圖１－３所示。在ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ的三種系統(tǒng)中，比較簡(jiǎn)單的是ＩＩ型系統(tǒng)，對(duì)其研宄的??也比較透徹。ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)在抵御外源噬菌體的侵入時(shí)，Ｃａｓ家族蛋白只有Ｃａｓ９??蛋白參與。成熟的ｃｒＲＮＡ與ｔｒａｃｒＲＮＡ結(jié)合，形成嵌合體ＲＮＡ分子，稱為向?qū)В遥危粒ǎ樱椋睿纾欤??ｇｕｉｄｅＲＮＡ，ｓｇＲＮＡ），ｓｇＲＮＡ具有定位的功能，它與靶序列上的ＤＮＡ序列進(jìn)行互補(bǔ)配??對(duì)，實(shí)現(xiàn)特異性的定點(diǎn)修飾。在ｓｇＲＮＡ的介導(dǎo)下，Ｃａｓ９蛋白識(shí)別ＰＡＭ序列，在目的基因??處產(chǎn)生切割，形成ＤＳＢ缺口，啟動(dòng)基因組的自我修復(fù)機(jī)制，進(jìn)行非同源末端連接以及同源??重組修復(fù)，最終實(shí)現(xiàn)對(duì)基因組基因的定點(diǎn)敲除、特異突變引入以及定點(diǎn)修飾。??

２．１禽內(nèi)源性白血病病毒ＡＬＶＥ１的序列分析??根據(jù)ＮＣＢＩ上公布的序列信息，對(duì)本章材料與方法部分１．４．１表１中的所有序列進(jìn)行同??源性和進(jìn)化樹分析，結(jié)果如圖２－１所示。結(jié)果顯示：禽內(nèi)源性白血病病毒ＡＬＶＥ１序列與禽??外源性白血病病毒的不同亞群之間高度同源，達(dá)到８５％以上。??Ａ??ｔｉｌｌ??ＡＬＶＡ．ＲＳＡ????Ｉ?—??�。剩榘啵�?■■丨＂■？??■ＡＬ’Ｏｇｕｓ．，??■■■■■■＂??ＡｌＡＶＸ?ｉ???」——————??ＡｔＷ?—Ｊ??１?妨??Ａｉ．ｖ－３ｊｍＧｒｉ??Ｍ??ｊａｖ．？＿ＮＤｉＧ｝ｅｊ??Ｊ??Ｂ??１００?ＡＬＶＥ?ｅｖ－１??湖［?＾?ＡＬＹＥ?ＳＤ０５０１?－??？￣ｆＸ?＾?ＡＬＶＡ?ＳＤＡＵ０３Ｅ１??９８?；??ＡＬＶＡ?ＲＳＡ???ＡＬＶＣ?Ｐｒａｇｕｅ?Ｃ??：＿＿?ｒ?－?—？?ＡＬＶＢ?Ｓｃｈｍｉｄｔ＇Ｒｕｐｐｉｎ?Ｂ??７，ｌｊ■—ＡＬ＼／Ｄ?Ｓｃｈｍｉｄｔ－Ｒｕｐｐｉｎ?Ｄ??ｉ—??…Ａ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基因組編輯技術(shù)在植物中的研究進(jìn)展與應(yīng)用前景[J]. 謝科,饒力群,李紅偉,安學(xué)麗,方才臣,萬(wàn)向元.  中國(guó)生物工程雜志. 2013(06)
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[3]禽白血病病毒特性的研究進(jìn)展[J]. 郝春麗,胡梅,柴建亭.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2010(01)
[4]真核mRNA轉(zhuǎn)錄終止機(jī)制[J]. 郭曉強(qiáng),王江雁,王仁杰.  細(xì)胞生物學(xué)雜志. 2005(04)
[5]J亞群禽白血病病毒研究進(jìn)展[J]. 楊玉瑩.  中國(guó)病毒學(xué). 2003(01)

博士論文
[1]SV40PolyA活化基因元件突變影響GFP報(bào)告基因表達(dá)[D]. 王紅鋼.河北醫(yī)科大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3441232