骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在肌肉生長發(fā)育、再生和損傷修復(fù)中扮演著非常重要的角色。本試驗主要研究L-肌肽對骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖和分化的影響,揭示L-肌肽促進(jìn)豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增值和分化的機(jī)理。試驗一選取健康1日齡的長白豬,優(yōu)化分離程序,分離豬背最長肌衛(wèi)星細(xì)胞,采用差速貼壁法對分離得到的衛(wèi)星細(xì)胞進(jìn)行純化;接種96孔板,培養(yǎng)24 h后,用含0、0.2、2、1、10、20和40 mM/L的L-肌肽的細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行處理,每個處理10個重復(fù)。結(jié)果顯示:與對照組相比,0.2、1和2 mM/L的L-肌肽顯著提高了（P<0.05）衛(wèi)星細(xì)胞接種72、96和120 h的OD值,40 mM/L的L-肌肽顯著抑制了（P<0.05）衛(wèi)星細(xì)胞接種120 h的OD值,對于其他時間點的OD值雖然具有抑制作用,但差異不顯著（P>0.05）。這說明0.2、1和2 mM/L促進(jìn)了衛(wèi)星細(xì)胞增值,而40 mM/L的L-肌肽具有抑制衛(wèi)星細(xì)胞的增值的作用。因此,選擇0、0.2、2和20 mM/L的L-肌肽進(jìn)行后續(xù)試驗。試驗二取生長良好的第3代衛(wèi)星細(xì)胞,接種96/6孔板,培養(yǎng)24 h后,分別用含0、0.2、2和20 mM/L的L-肌... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．３衛(wèi)星細(xì)胞的分裂??Ｆｉｇ?１．３?Ｔｈｅ?ＳＣｓ?ｐｒｏｌｉ仿ｒａｔｉｐｎ?ｉｎ?ｕｎｉｎｊｕｒｅｄ?ａｎｄ?ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ?ｍｕｓｃｌｅ??２．２．２衛(wèi)星細(xì)胞與肌纖維細(xì)胞??

豬背最長肌衛(wèi)星細(xì)胞的分離與純化

３．２背最長肌衛(wèi)星細(xì)胞的鑒定??通過形態(tài)學(xué)觀察已經(jīng)初步確定分離得到的細(xì)胞衛(wèi)星細(xì)胞。為了進(jìn)一步確定，取上述分離得到??的細(xì)胞，Ｗ?ＩｘｌＯ５?ｃｅｌｌｓ／ｍＬ的濃度接種６孔板，其純度用Ｐａｘ?７進(jìn)行鑒定（圖２．２）。??圖２．２背最長肌衛(wèi)星細(xì)胞的鑒定（Ａ圖為ＤＡＰＩ染色，Ｂ圖為Ｐａｘ?７染色，Ｃ圖為融合圖）??Ｆｉｇ?２．２?Ｔｈｅ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓａｔｅｌＨ化?ｃｅｌｌｓ??（Ｆｉｇ?Ａ?ｗａｓ?ＤＡＰＩ；?Ｆｉ呂?Ｂ?ｗａｓ?Ｐａｘ?７，?Ｆｉｇ?Ｃ?ｗａｓ?ｍｅｒ呂ｅｄ?ｐｉｃｔｕｒｅ）?邊??由圖２．２可知，Ｐａｘ?７是衛(wèi)星細(xì)胞的標(biāo)志性基因，分寓得到的衛(wèi)星細(xì)胞經(jīng)Ｐａｘ?７鑒定的陽性率??高達(dá)９５％Ｌ；ｌ上，可用于后續(xù)試驗。??３３以肌化巧度的篩逸??衛(wèi)星細(xì)胞在離體培養(yǎng)和體內(nèi)所面臨的環(huán)境有很大的不同，不同部位骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞對以肌化??？?的最適濃度范闡及耐受量也不相同。網(wǎng)此＞?心肌狀在動物日糧中的添加量與細(xì)胞培養(yǎng)中的添郵ｉ??有很大不同，動物實驗的添加量不能直接應(yīng)用到本試驗中。所我們首先對以肌狀的添加劑ｉ范??圍進(jìn)行篩選。??由圖２．３可知，與對照組相比．添加０．２、１和２?ｍＭ化的心肌狀可顯著提高（Ｐ?＜?０．０５）衛(wèi)??星細(xì)胞接種７２、９６和１２０?ｈ時的ＯＤ值：１０和２０?ｍＭ化的心肌化的ＯＤ值與對照組相比沒有顯??著差異（Ｐ＞〇．〇５）；?４０ｍＭ／Ｌ的Ｌ肌化畳著降低了（尸＜０．０５）衛(wèi)星細(xì)胞接種１２０ｈ的ＯＤ值。這??說明：低濃度梯度的以肌狀（０．２、１、１０?ｍＭ／Ｌ）可促進(jìn)衛(wèi)星細(xì)胞增殖

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3437911