p-內(nèi)酰胺類藥物是發(fā)現(xiàn)最早、應(yīng)用最廣的一大類抗生素,臨床常用于預(yù)防和治療動(dòng)物疾病。長(zhǎng)期濫用及不合理使用此類藥物易造成動(dòng)物體內(nèi)藥物殘留,由此產(chǎn)生的食品安全問題已引起國(guó)內(nèi)外普遍關(guān)注。亟需發(fā)展快速、可靠、高效的檢測(cè)方法來監(jiān)控動(dòng)物源食品此類藥物殘留,從而保障食品安全和人類健康。目前,基于抗體建立的β-內(nèi)酰胺類檢測(cè)方法往往只能檢測(cè)一種或少數(shù)幾種結(jié)構(gòu)相似的藥物。青霉素結(jié)合蛋白（penicillin binding proteins,PBPs）可以特異性識(shí)別這類藥物,已成為β-內(nèi)酰胺類藥物殘留檢測(cè)方法研究的熱點(diǎn)。本研究基于肺炎鏈球菌R6的PBP3蛋白建立了牛奶中p-內(nèi)酰胺類藥物殘留快速檢測(cè)方法,并通過分子對(duì)接和定點(diǎn)突變技術(shù)對(duì)PBP3蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步研究。體外擴(kuò)增pbp3基因,構(gòu)建表達(dá)載體pET28b-pbp3,獲得N端帶6×His融合標(biāo)簽的重組蛋白PBP3。優(yōu)化誘導(dǎo)表達(dá)條件,在0.2mM異丙基-p-D-硫代吡喃半乳糖苷（Isopropyl β-D-1-Thiogalactopyranoside,IPTG）、20℃下誘導(dǎo)16h時(shí),重組蛋白在大腸桿菌BL21（DE3）細(xì)胞內(nèi)實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)。采用Ni-NTA... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：116 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

PBPs與天然底物作用機(jī)制["2]

PBP3二級(jí)結(jié)構(gòu)圖

圖2-lp6p3基因丨廣增Figure 2-1 Amplification of pbp3 gene體pEASY-Tl-pbp3構(gòu)建及鑒定回收，連接pEASY-Tl載體并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Trans5a中

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]β-內(nèi)酰胺類抗生素殘留受體分析法的研究進(jìn)展[J]. 程古月,彭娟,王玉蓮,董小冰,彭大鵬,郝海紅,黃玲利,袁宗輝.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(03)
[2]動(dòng)物性產(chǎn)品中抗生素殘留的原因、危害及檢測(cè)方法淺析[J]. 張化民,李慶華,肖文剛.  湖北畜牧獸醫(yī). 2014(01)
[3]Development of a Rapid Multi-residue Assay for Detecting β-lactams Using Penicillin Binding Protein 2x[J]. ZENG Kum,ZHANG Jing,WANG Yang,WANG ZhanHui,ZHANG Su Xia,WU Chong Ming,SHEN Jian Zhong.  Biomedical and Environmental Sciences. 2013(02)
[4]微生物抑制法檢測(cè)牛乳中青霉素類藥物殘留的研究[J]. 馬麗蘋,糾敏,秦翠麗,趙君峰,張春雷.  現(xiàn)代食品科技. 2013(01)
[5]分子印跡固相萃取/毛細(xì)管電泳法檢測(cè)牛奶中頭孢噻肟殘留[J]. 陳玎玎,何東旭,祁克宗,陸翠珍.  分析測(cè)試學(xué)報(bào). 2012(10)
[6]標(biāo)記免疫分析在農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 楊代鳳,劉騰飛,鄧金花,顧俊榮,董明輝.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2012(30)
[7]ScMYB原核蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的影響因素研究[J]. 陳雪燕,曹新有,張羽.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(03)
[8]萊克多巴胺熒光微球免疫層析檢測(cè)方法的建立[J]. 劉道峰,鄧省亮,賴衛(wèi)華,夏駿.  食品與機(jī)械. 2012(01)
[9]Simultaneous determination of 14β-lactam antibiotics in cosmetic products by liquid chromatography tandem mass spectrometry method[J]. Cai Sheng Wu,Jin Lan Zhang,Yan Ling Qiao,Yi Lin Wang,Zhi Rong Chen~* Institute of Materia Medica,Chinese Academy of Medical Sciences,Peking Union Medical College,Beijing 100050,China.  Chinese Chemical Letters. 2011(03)
[10]動(dòng)物源性食品中β-內(nèi)酰胺類藥物殘留檢測(cè)研究進(jìn)展[J]. 袁萍,劉亞風(fēng),祝偉霞,楊娜,楊冀州,魏蔚.  檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊. 2010(03)

博士論文
[1]動(dòng)物性食品中喹諾酮類藥物殘留的熒光偏振免疫分析研究[D]. 米鐵軍.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]計(jì)算機(jī)輔助分子設(shè)計(jì)提高蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性的研究[D]. 田健.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011

碩士論文
[1]牛奶中頭孢類抗生素的免疫層析試紙條和ELISA試劑盒檢測(cè)方法研究[D]. 謝會(huì)玲.江南大學(xué) 2009
[2]SELEX技術(shù)篩選青霉素類抗生素適體及其運(yùn)用方法的初步探索[D]. 秦川.西南大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3435741