KDM1A對(duì)牦牛卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟及其發(fā)育潛能的影響
發(fā)布時(shí)間：2021-10-12 07:53
旨在探討KDM1A對(duì)牦牛卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟及其發(fā)育潛能的影響。本研究在體外成熟液中添加不同濃度的KDM1A特異性抑制劑GSK-KDM1A,牦牛卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體（COCs）體外培養(yǎng)24 h后,觀察卵丘細(xì)胞的擴(kuò)展和第一極體的排出情況;利用免疫熒光檢測(cè)體外培養(yǎng)過程中卵母細(xì)胞內(nèi)KDM1A的表達(dá)模式;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)體外培養(yǎng)卵母細(xì)胞內(nèi)Kdm1a、Oct-4、Sox-2以及Nanog的表達(dá)水平;體外培養(yǎng)成熟后的牦牛卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精,觀察其卵裂率與囊胚形成率。結(jié)果顯示,體外培養(yǎng)24 h后,GSK-KDM1A組的卵丘細(xì)胞擴(kuò)展程度顯著低于對(duì)照組（P<0.05）,而320 nmol·L-1組的卵丘細(xì)胞擴(kuò)展程度和第一極體排出率均顯著低于160 nmol·L-1組（P<0.05）。在卵母細(xì)胞體外成熟過程中,Kdm1a呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)表達(dá)模式,MⅠ期的表達(dá)水平顯著低于GV和MⅡ期（P<0.05）;添加GSK-KDM1A能顯著抑制卵母細(xì)胞中KDM1A蛋白的表達(dá)（P<0.05）,320 nmol·L-1組各時(shí)間點(diǎn)K...
【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,51(10)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：10 頁
【部分圖文】：
牦牛卵丘細(xì)胞的擴(kuò)展及卵母細(xì)胞成熟過程中的3個(gè)時(shí)期
表2 KDM1A對(duì)COCs中卵丘細(xì)胞擴(kuò)展及卵母細(xì)胞成熟的影響Table 2 Effects of KDM1A on the cumulus cells expansion and oocyte maturation GSK添加濃度/(nmol·L-1)GSK concentration COCs數(shù)量(n)No. of COCs 時(shí)間/hTime 卵丘細(xì)胞面積/μm2Area of cumulus cells 成熟率/%Rate of maturation 0 186(3) 0 178.72±5.27d 88.17±0.65a 24 446.80±3.76a 160 164(3) 24 393.19±5.63b 65.24±0.38b 320 158(3) 24 367.84±2.78c 51.27±0.35c 不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05），下同The different lower case letters indicate significant difference(P<0.05),the below as the same2.3 KDM1A對(duì)胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的影響
COCs在添加不同濃度GSK-KDM1A的卵母細(xì)胞成熟液中培養(yǎng),對(duì)各組培養(yǎng)0、12和24 h的卵母細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色(圖4),對(duì)其相對(duì)灰度值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析(圖5)。結(jié)果顯示,KDM1A 蛋白在卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟過程中呈動(dòng)態(tài)表達(dá),且12 h 時(shí)的相對(duì)表達(dá)量顯著低于0和24 h (P<0.05),與RT-qPCR結(jié)果吻合。此外,KDM1A的表達(dá)量與GSK-KDM1A的濃度呈負(fù)相關(guān),320 nmol·L-1組各時(shí)間點(diǎn)的KDM1A表達(dá)量顯著低于160 nmol·L-1組(P<0.05)。2.5 KDM1A對(duì)牦牛卵母細(xì)胞發(fā)育潛能的影響
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]牦牛KDM1A基因克隆及其在不同發(fā)育時(shí)期睪丸中的表達(dá)規(guī)律[J]. 韓杰,熊顯榮,王艷,楊顯英,阿果約達(dá),黃向月,李鍵. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(12)
[2]基于RNA-Seq高通量測(cè)序技術(shù)的牦牛卵巢轉(zhuǎn)錄組研究:進(jìn)一步完善牦牛基因結(jié)構(gòu)及挖掘與繁殖相關(guān)新基因[J]. 蘭道亮,熊顯榮,位艷麗,徐通,鐘金城,字向東,王永,李鍵. 中國科學(xué):生命科學(xué). 2014(03)
本文編號(hào)：3432170
【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,51(10)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：10 頁
【部分圖文】：
牦牛卵丘細(xì)胞的擴(kuò)展及卵母細(xì)胞成熟過程中的3個(gè)時(shí)期
表2 KDM1A對(duì)COCs中卵丘細(xì)胞擴(kuò)展及卵母細(xì)胞成熟的影響Table 2 Effects of KDM1A on the cumulus cells expansion and oocyte maturation GSK添加濃度/(nmol·L-1)GSK concentration COCs數(shù)量(n)No. of COCs 時(shí)間/hTime 卵丘細(xì)胞面積/μm2Area of cumulus cells 成熟率/%Rate of maturation 0 186(3) 0 178.72±5.27d 88.17±0.65a 24 446.80±3.76a 160 164(3) 24 393.19±5.63b 65.24±0.38b 320 158(3) 24 367.84±2.78c 51.27±0.35c 不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05），下同The different lower case letters indicate significant difference(P<0.05),the below as the same2.3 KDM1A對(duì)胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的影響
COCs在添加不同濃度GSK-KDM1A的卵母細(xì)胞成熟液中培養(yǎng),對(duì)各組培養(yǎng)0、12和24 h的卵母細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色(圖4),對(duì)其相對(duì)灰度值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析(圖5)。結(jié)果顯示,KDM1A 蛋白在卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟過程中呈動(dòng)態(tài)表達(dá),且12 h 時(shí)的相對(duì)表達(dá)量顯著低于0和24 h (P<0.05),與RT-qPCR結(jié)果吻合。此外,KDM1A的表達(dá)量與GSK-KDM1A的濃度呈負(fù)相關(guān),320 nmol·L-1組各時(shí)間點(diǎn)的KDM1A表達(dá)量顯著低于160 nmol·L-1組(P<0.05)。2.5 KDM1A對(duì)牦牛卵母細(xì)胞發(fā)育潛能的影響
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]牦牛KDM1A基因克隆及其在不同發(fā)育時(shí)期睪丸中的表達(dá)規(guī)律[J]. 韓杰,熊顯榮,王艷,楊顯英,阿果約達(dá),黃向月,李鍵. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(12)
[2]基于RNA-Seq高通量測(cè)序技術(shù)的牦牛卵巢轉(zhuǎn)錄組研究:進(jìn)一步完善牦牛基因結(jié)構(gòu)及挖掘與繁殖相關(guān)新基因[J]. 蘭道亮,熊顯榮,位艷麗,徐通,鐘金城,字向東,王永,李鍵. 中國科學(xué):生命科學(xué). 2014(03)
本文編號(hào)：3432170
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