沙門菌是一種胞內菌，既可以作為原核質粒的表達載體，也可以作為真核質粒的表達載體。其不僅具有制備簡單、免疫方便、有較強的免疫原性等優(yōu)勢，而且其誘導的免疫反應更強更持久。鼠傷寒沙門菌作為沙門菌載體的研究應用比較廣泛，但以其為載體攜帶外源抗原表達外源基因時，由于生存壓力，其所攜帶的外源基因可能不能穩(wěn)定遺傳。最近研究的一種無抗性的宿主載體平衡致死系統(tǒng)為高效表達外源基因且無抗性標記提供了解決途徑。asd（aspartic semialdehyde dehydrogenase）基因編碼天冬氨酸β-半乳糖脫氫酶，該酶是合成二氨基庚二酸（diaminopimelic acid, DAP）的必需酶，在無外源DAP條件下，含asd基因的載體會與缺失asd基因的減毒菌株互補結合，否則，減毒菌株會溶菌死亡。研究內容主要包括：1.鼠傷寒沙門菌crp cya asdSL1344缺失株的構建及篩選以含有重組自殺性質粒χ7213（pREΔasd）為供體菌， crp cyaSL1344為受體菌，利用重組自殺性質粒介導細菌基因等位交換的作用，兩步法篩選出蔗糖抗性（SUCr）及DAP依賴菌落，并通過PCR及測序鑒定，確定構... 

【文章來源】：河南科技大學河南省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號表
第1章 文獻綜述
    1.1 沙門菌的簡介
        1.1.1 沙門菌的生物學特性
        1.1.2 沙門菌的危害程度
        1.1.3 沙門菌的檢測與防控
    1.2 減毒沙門氏菌疫苗的有關研究
        1.2.1 沙門菌的減毒基因
        1.2.2 減毒沙門菌的侵入機制
        1.2.3 減毒沙門菌疫苗的應用研究
    1.3 減毒沙門菌作為載體的研究
        1.3.1 減毒沙門菌作為載體的優(yōu)勢
        1.3.2 減毒沙門菌作為載體在疫苗中的應用研究
        1.3.3 減毒沙門菌作為載體的不足與改進之處
    1.4 展望
第2章 減毒鼠傷寒沙門菌 crp cya asdSL1344缺失株構建與鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、質粒及培養(yǎng)條件
        2.1.2 酶、試劑、抗生素及培養(yǎng)基
        2.1.3 主要試劑、抗生素及培養(yǎng)基的配制方法
        2.1.4 主要實驗器材
    2.2 方法
        2.2.1 引物設計與合成
        2.2.2 細菌的活化
        2.2.3 大腸桿菌χ7213感受態(tài)細胞的制備
        2.2.4 細菌或重組質粒的PCR鑒定
        2.2.5 鼠傷寒沙門菌ΔcrpΔcya asdSL1344缺失株的構建
        2.2.6 鼠傷寒沙門菌ΔcrpΔcya asdSL1344缺失株的鑒定
    2.3 結果與分析
    2.4 討論
        2.4.1 減毒沙門菌菌株缺失基因的選擇
        2.4.2 重組自殺性質粒在疫苗中的相關研究
        2.4.3 染色體質粒載體平衡致死系統(tǒng)在疫苗中的應用研究
第3章 減毒鼠傷寒沙門菌 crp cya asdSL1344缺失株生物學特性初步研究
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 實驗動物
        3.1.3 酶、試劑及培養(yǎng)基
        3.1.4 主要試劑及培養(yǎng)基的配制方法
        3.1.5 主要實驗器材
    3.2 方法
        3.2.1 沙門氏菌的PCR特異性鑒定
        3.2.2 缺失株ΔcrpΔcya asdSL1344的表型鑒定
        3.2.3 缺失株ΔcrpΔcya asdSL1344的遺傳穩(wěn)定性
        3.2.4 缺失株ΔcrpΔcya asdSL1344的生長特性
        3.2.5 缺失株 crp cya asdSL1344的毒力測定
    3.3 結果與分析
        3.3.1 沙門菌的PCR鑒定
        3.3.2 缺失株 crp cya asdSL1344的表型鑒定
        3.3.3 asd缺失片段的穩(wěn)定遺傳
        3.3.4 減毒株與親本株、強毒株的生長特性比較
        3.3.5 重組菌株 crp cya asd SL1344（pYA3493）的構建及鑒定
        3.3.6 重組菌株ΔcrpΔcya asd SL1344（pYA3493）的毒力測定
    3.4 討論
        3.4.1 基因缺失對缺失菌株 crp cya asd SL1344生化特性的影響
        3.4.2 基因缺失對重組菌株ΔcrpΔcya asdSL1344（pYA3493）毒力的影響
第4章 結論
參考文獻
縮略語詞匯表
致謝
攻讀碩士學位期間的研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]減毒鼠傷寒沙門氏菌SL7207asd基因突變株的構建及其生物學特性[D]. 張玉紅.揚州大學 2006



本文編號：3430875