沙門菌是一種胞內(nèi)菌，既可以作為原核質(zhì)粒的表達(dá)載體，也可以作為真核質(zhì)粒的表達(dá)載體。其不僅具有制備簡(jiǎn)單、免疫方便、有較強(qiáng)的免疫原性等優(yōu)勢(shì)，而且其誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)更強(qiáng)更持久。鼠傷寒沙門菌作為沙門菌載體的研究應(yīng)用比較廣泛，但以其為載體攜帶外源抗原表達(dá)外源基因時(shí)，由于生存壓力，其所攜帶的外源基因可能不能穩(wěn)定遺傳。最近研究的一種無抗性的宿主載體平衡致死系統(tǒng)為高效表達(dá)外源基因且無抗性標(biāo)記提供了解決途徑。asd（aspartic semialdehyde dehydrogenase）基因編碼天冬氨酸β-半乳糖脫氫酶，該酶是合成二氨基庚二酸（diaminopimelic acid, DAP）的必需酶，在無外源DAP條件下，含asd基因的載體會(huì)與缺失asd基因的減毒菌株互補(bǔ)結(jié)合，否則，減毒菌株會(huì)溶菌死亡。研究?jī)?nèi)容主要包括：1.鼠傷寒沙門菌crp cya asdSL1344缺失株的構(gòu)建及篩選以含有重組自殺性質(zhì)粒χ7213（pREΔasd）為供體菌， crp cyaSL1344為受體菌，利用重組自殺性質(zhì)粒介導(dǎo)細(xì)菌基因等位交換的作用，兩步法篩選出蔗糖抗性（SUCr）及DAP依賴菌落，并通過PCR及測(cè)序鑒定，確定構(gòu)... 

【文章來源】：河南科技大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 沙門菌的簡(jiǎn)介
        1.1.1 沙門菌的生物學(xué)特性
        1.1.2 沙門菌的危害程度
        1.1.3 沙門菌的檢測(cè)與防控
    1.2 減毒沙門氏菌疫苗的有關(guān)研究
        1.2.1 沙門菌的減毒基因
        1.2.2 減毒沙門菌的侵入機(jī)制
        1.2.3 減毒沙門菌疫苗的應(yīng)用研究
    1.3 減毒沙門菌作為載體的研究
        1.3.1 減毒沙門菌作為載體的優(yōu)勢(shì)
        1.3.2 減毒沙門菌作為載體在疫苗中的應(yīng)用研究
        1.3.3 減毒沙門菌作為載體的不足與改進(jìn)之處
    1.4 展望
第2章 減毒鼠傷寒沙門菌 crp cya asdSL1344缺失株構(gòu)建與鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、質(zhì)粒及培養(yǎng)條件
        2.1.2 酶、試劑、抗生素及培養(yǎng)基
        2.1.3 主要試劑、抗生素及培養(yǎng)基的配制方法
        2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)器材
    2.2 方法
        2.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.2.2 細(xì)菌的活化
        2.2.3 大腸桿菌χ7213感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.4 細(xì)菌或重組質(zhì)粒的PCR鑒定
        2.2.5 鼠傷寒沙門菌ΔcrpΔcya asdSL1344缺失株的構(gòu)建
        2.2.6 鼠傷寒沙門菌ΔcrpΔcya asdSL1344缺失株的鑒定
    2.3 結(jié)果與分析
    2.4 討論
        2.4.1 減毒沙門菌菌株缺失基因的選擇
        2.4.2 重組自殺性質(zhì)粒在疫苗中的相關(guān)研究
        2.4.3 染色體質(zhì)粒載體平衡致死系統(tǒng)在疫苗中的應(yīng)用研究
第3章 減毒鼠傷寒沙門菌 crp cya asdSL1344缺失株生物學(xué)特性初步研究
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.3 酶、試劑及培養(yǎng)基
        3.1.4 主要試劑及培養(yǎng)基的配制方法
        3.1.5 主要實(shí)驗(yàn)器材
    3.2 方法
        3.2.1 沙門氏菌的PCR特異性鑒定
        3.2.2 缺失株ΔcrpΔcya asdSL1344的表型鑒定
        3.2.3 缺失株ΔcrpΔcya asdSL1344的遺傳穩(wěn)定性
        3.2.4 缺失株ΔcrpΔcya asdSL1344的生長(zhǎng)特性
        3.2.5 缺失株 crp cya asdSL1344的毒力測(cè)定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 沙門菌的PCR鑒定
        3.3.2 缺失株 crp cya asdSL1344的表型鑒定
        3.3.3 asd缺失片段的穩(wěn)定遺傳
        3.3.4 減毒株與親本株、強(qiáng)毒株的生長(zhǎng)特性比較
        3.3.5 重組菌株 crp cya asd SL1344（pYA3493）的構(gòu)建及鑒定
        3.3.6 重組菌株ΔcrpΔcya asd SL1344（pYA3493）的毒力測(cè)定
    3.4 討論
        3.4.1 基因缺失對(duì)缺失菌株 crp cya asd SL1344生化特性的影響
        3.4.2 基因缺失對(duì)重組菌株ΔcrpΔcya asdSL1344（pYA3493）毒力的影響
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
縮略語詞匯表
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3430875