發(fā)布時(shí)間：2021-10-09 18:28

　　本研究選取分離自某發(fā)病鴨場(chǎng)的菌株：經(jīng)過(guò)細(xì)菌分離鑒定為鴨源多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida,PM）,并用此菌株作為制苗菌株,用甲醛滅活后與礦物油佐劑高速乳化混勻,制備鴨源多殺性巴氏桿菌油佐劑滅活疫苗。通過(guò)對(duì)試制疫苗的物理性狀、疫苗的無(wú)菌檢測(cè),疫苗的安全性檢測(cè),對(duì)同源毒株的攻毒保護(hù)性試驗(yàn),采用間接酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Enzye Linked Immunosorbent Assay,ELISA）對(duì)試驗(yàn)鴨和養(yǎng)殖場(chǎng)鴨產(chǎn)生的特異性抗體水平消長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行檢測(cè),完成對(duì)該疫苗的安全性、免疫效力等評(píng)估。1.細(xì)菌的分離鑒定：本研究菌株選取于某發(fā)病鴨場(chǎng),挑取病料的心血,肝臟,接種于血瓊脂平板培養(yǎng)基中培養(yǎng),通過(guò)細(xì)菌生物學(xué)培養(yǎng)特性、API 20NE生化試紙條和16s rRNA基因PCR鑒定結(jié)果表明該菌株為多殺性巴氏桿菌；Biolog全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)鑒定結(jié)果表明分離菌株為多殺性巴氏桿菌多殺亞型；PCR莢膜分子分型鑒定結(jié)果為莢膜A型多殺性巴氏桿菌。2.疫苗的物理性狀及無(wú)菌檢測(cè)：疫苗的物理性狀通過(guò)從疫苗的外觀,劑型,黏稠度,穩(wěn)定性四個(gè)方面來(lái)檢驗(yàn),結(jié)果顯示該疫苗符合油佐劑疫苗制備的基本標(biāo)準(zhǔn)。然后... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1. 前言
        1.1 多殺性巴氏桿菌的病原學(xué)
        1.2 多殺性巴氏桿菌分型的研究
        1.3 鴨源多殺性巴氏桿菌的免疫機(jī)理研究
        1.4 禽多殺性巴氏桿菌疫苗的研究進(jìn)展
            1.4.1 弱毒疫苗
            1.4.2 滅活疫苗
            1.4.3 禽霍亂莢膜亞單位疫苗
            1.4.4 禽霍亂雙型原生質(zhì)體融合株滅活苗
            1.4.5 基因疫苗
        1.5 ELISA在檢測(cè)疫苗免疫抗體的應(yīng)用
        1.6 本實(shí)驗(yàn)研究的目的意義
第二章 鴨源多殺性巴氏桿菌的分離鑒定
    1. 試驗(yàn)材料
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 培養(yǎng)基的配制
    2. 試驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)
        2.2 細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        2.3 生化試驗(yàn)鑒定
            2.3.1 API 20 NE檢測(cè)
            2.3.2 Biolog檢測(cè)
        2.4 16s rDNA鑒定
            2.4.1 引物設(shè)計(jì)
            2.4.2 16s rDNA PCR
            2.4.3 PCR產(chǎn)物測(cè)序
        2.5 PCR莢膜分型
    3. 結(jié)果
        3.1 培養(yǎng)特性
        3.2 生長(zhǎng)曲線圖
        3.3 鏡檢結(jié)果
        3.4 生化試驗(yàn)結(jié)果
            3.4.1 API 20 NE結(jié)果
            3.4.2 Biolog檢測(cè)結(jié)果
        3.5 16s r RNA PCR結(jié)果
        3.6 PCR莢膜分型結(jié)果
    4. 討論
第三章 鴨多殺性巴氏桿菌的油佐劑疫苗的制備與應(yīng)用
    1. 試驗(yàn)材料
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑配制
    2. 試驗(yàn)方法
        2.1 毒力的測(cè)定
            2.1.1 毒力的復(fù)蘇
            2.1.2 細(xì)菌毒力的測(cè)定
        2.2 疫苗的制作
            2.2.1 毒力的復(fù)蘇
            2.2.2 菌液的培養(yǎng)
            2.2.3 菌液的滅活
            2.2.4 菌液的濃縮
            2.2.5 疫苗的制作
        2.3 疫苗物理性狀檢測(cè)
        2.4 疫苗的安全性檢測(cè)
            2.4.1 無(wú)菌檢測(cè)
            2.4.2 疫苗安全性試驗(yàn)
        2.5 動(dòng)物攻毒保護(hù)試驗(yàn)
            2.5.1 試驗(yàn)動(dòng)物
            2.5.2 攻毒保護(hù)試驗(yàn)
            2.5.3 細(xì)菌再分離
        2.6 抗體消長(zhǎng)規(guī)律檢測(cè)
            2.6.1 試驗(yàn)動(dòng)物
            2.6.2 抗體檢測(cè)
            2.6.3 液的采集
            2.6.4 間接ELISA檢測(cè)抗體
        2.7 疫苗的生產(chǎn)應(yīng)用
    3. 結(jié)果
        3.1 疫苗的研制
            3.1.1 疫苗的物理的性狀與無(wú)菌檢測(cè)結(jié)果
            3.1.2 疫苗安全性試驗(yàn)結(jié)果
        3.2 細(xì)菌毒力檢測(cè)結(jié)果
        3.3 攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果
        3.4 死亡鴨的臨床癥狀與解剖結(jié)果
            3.4.1 臨床癥狀
            3.4.2 解剖病理變化
        3.5 細(xì)菌再分離鑒定
        3.6 抗體消長(zhǎng)規(guī)律檢測(cè)結(jié)果
            3.6.1 ELISA最佳反應(yīng)條件的結(jié)果
            3.6.2 ELISA待檢血清檢測(cè)結(jié)果
        3.7 疫苗的生產(chǎn)應(yīng)用
    4. 討論
        4.1 疫苗的規(guī)范性
        4.2 疫苗的佐劑與安全性
        4.3 禽多殺性巴氏桿菌油佐劑疫苗的免疫效力
        4.4 抗體消長(zhǎng)規(guī)律的研究
        4.5 疫苗的生產(chǎn)應(yīng)用
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]動(dòng)物免疫增強(qiáng)劑的研究進(jìn)展[J]. 王思蘆.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2013(05)
[2]禽多殺性巴氏桿菌外膜蛋白單價(jià)DNA疫苗及融合DNA疫苗的免疫效果分析[J]. 宮強(qiáng),張愛(ài)國(guó),牛明福,秦翠麗,孫曉菲.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2012(08)
[3]多殺性巴氏桿菌aroA基因缺失突變株的構(gòu)建及鑒定[J]. 郭東春,盧艷,劉家森,原冬偉,張愛(ài)芹,姜騫,林歡,司昌德,曲連東.  微生物學(xué)報(bào). 2012(04)
[4]鴨源多殺性巴氏桿菌的分離鑒定與耐藥性分析[J]. 張文波,冷闖,鄧舜洲,余根蓮.  中國(guó)家禽. 2012(01)
[5]禽多殺性巴氏桿菌脂蛋白E基因的原核表達(dá)及其對(duì)小鼠的免疫原性[J]. 崔衛(wèi)濤,胡思順,王延昭,周曉芬,李自力,肖運(yùn)才,畢丁仁.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(04)
[6]禽多殺性巴氏桿菌交叉保護(hù)因子的研究進(jìn)展[J]. 張文通,魏鳳,肖躍強(qiáng),沈志強(qiáng).  中國(guó)家禽. 2010(10)
[7]多殺性巴氏桿菌毒力因子、免疫原及重要基因研究進(jìn)展[J]. 王帥濤,宮強(qiáng),秦翠麗.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2010(03)
[8]禽霍亂、大腸桿菌病和克雷伯菌病多價(jià)蜂膠三聯(lián)滅活疫苗的研制[J]. 金天明,谷禹,馬文芝,周淑云,李富桂,郭亮,張建斌.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2009(15)
[9]禽霍亂分離菌株不同劑型滅活疫苗的免疫對(duì)比試驗(yàn)[J]. 盧桂娟,陸有飛,韋嵐,高永銳.  廣西畜牧獸醫(yī). 2009(02)
[10]采用全菌抗原干燥包被法ELISA檢測(cè)禽霍亂血清抗體的研究[J]. 徐步,高明燕,龔建森,呂曉娟,單艷菊,劉學(xué)賢.  中國(guó)家禽. 2009(05)

碩士論文
[1]鴨源巴氏桿菌、大腸桿菌二聯(lián)多價(jià)蜂膠滅活疫苗研制及其免疫應(yīng)答反應(yīng)的動(dòng)態(tài)研究[D]. 劉義鈴.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3426788