鴿源禽I型副粘病毒（Pigeon Paramyxovirus type I, PPMV-1），又稱為鴿源新城疫病毒（PigeonNewcastle Disease Virus），能夠引起鴿的急性、高度接觸性傳染病。該類病毒屬于副粘病毒科，禽腮腺炎病毒屬。二十世紀(jì)七十年代，該病毒初次在中東地區(qū)被發(fā)現(xiàn)，其流行最高峰發(fā)生在二十世紀(jì)八十年代。本研究通過收集采自中國(guó)廣東、遼寧、吉林、黑龍江四個(gè)省份的發(fā)病鴿組織病料，應(yīng)用9-11日齡SPF雞胚分離病毒，共獲得8株P(guān)PMV-1毒株。通過蝕斑純化，將每株病毒挑選6個(gè)克隆進(jìn)行F基因測(cè)序發(fā)現(xiàn)，該8株P(guān)PMV-1毒株均為單一病毒。將該8株分離株分別進(jìn)行了致病力指數(shù)測(cè)定，表明均屬于中等或低等毒力病毒。通過將這8株P(guān)PMV-1毒株進(jìn)行全基因組測(cè)序，對(duì)其基因組結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)這些分離株基因組全長(zhǎng)均為15192nt，符合NDV基因組六堿基原則；其結(jié)構(gòu)基因順序?yàn)?’-NP-P-M-F-HN-L-5’；其F基因裂解位點(diǎn)為112RRQKRF117，與強(qiáng)毒裂解位點(diǎn)相一致。通過F基因部分片段（47-420nt）系統(tǒng)進(jìn)化樹分析可知，這些分離株屬于class II基因VIb型。... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 鴿源禽 I 型副粘病毒概述
    1.2 鴿源禽 I 型副粘病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展
        1.2.1 病毒分類地位和形態(tài)
        1.2.2 理化學(xué)特性
        1.2.3 生物學(xué)活性
        1.2.4 培養(yǎng)特性
        1.2.5 基因組及編碼蛋白的生物學(xué)特性
        1.2.6 鴿源禽 I 型副粘病毒的毒力特征
    1.3 鴿源禽 I 型副粘病毒國(guó)內(nèi)外流行情況
    1.4 診斷
    1.5 免疫與預(yù)防
    1.6 研究目的和意義
第二章 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 病料來源
        2.1.2 SPF 雞胚、SPF 雞、家養(yǎng)肉鴿和雞外周血紅細(xì)胞
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.5 引物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 病毒的分離鑒定
        2.2.2 血凝、血凝抑制試驗(yàn)
        2.2.3 原代雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）的制備
        2.2.4 原代雞胚成纖維細(xì)胞的傳代
        2.2.5 PPMV-1 病毒蝕斑純化
        2.2.6 觀察噬斑并挑取噬斑擴(kuò)增病毒
        2.2.7 病毒的復(fù)繁
        2.2.8 病毒 RNA 的提取以及 RT-PCR
        2.2.9 基因組 3’末端與 5’末端的擴(kuò)增
        2.2.10 瓊脂糖凝膠電泳鑒定
        2.2.11 測(cè)序結(jié)果的分析與拼接及毒株系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系分析
        2.2.13 致病性指數(shù)測(cè)定
        2.2.14 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.2.15 實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR 檢測(cè)病毒載量
        2.2.16 交叉血凝抑制試驗(yàn)
        2.2.17 交叉病毒中和試驗(yàn)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 病毒的分離鑒定
    3.2 分離株的噬斑純化
    3.3 測(cè)序結(jié)果分析
        3.3.1 每個(gè)毒株克隆之間的關(guān)系
        3.3.2 PPMV-1 分離株基因組組成分析
    3.4 系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系分析
        3.4.1 PPMV-1 分離株基因分型
        3.4.2 F 基因系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系分析
        3.4.3 全基因組系統(tǒng)進(jìn)化
    3.5 國(guó)內(nèi)外 PPMV-1 分離株基因組差異分析
        3.5.1 SimPlot 軟件分析國(guó)內(nèi)外毒株差異
        3.5.2 PPMV-1 國(guó)內(nèi)外分離株全基因組差異分析
    3.6 PPMV-1 毒株致病性指數(shù)
        3.6.1 PPMV-1 分離株 MDT 的測(cè)定
        3.6.2 PPMV-1 分離株 ICPI 的測(cè)定
    3.7 動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)
        3.7.1 不同 PPMV-1 毒株感染雞致病性試驗(yàn)及抗體水平檢測(cè)
        3.7.2 相同 PPMV-1 毒株感染不同宿主的致病性試驗(yàn)及抗體水平檢測(cè)
    3.8 交叉血凝抑制試驗(yàn)
    3.9 交叉中和試驗(yàn)
第四章 討論
    4.1 PPMV-1 的分離與鑒定
    4.2 PPMV-1 基因組結(jié)構(gòu)分析
    4.3 PPMV-1 毒株的系統(tǒng)進(jìn)化分析
    4.4 PPMV-1 國(guó)內(nèi)外分離株特點(diǎn)
    4.5 PPMV-1 毒力分析
    4.6 PPMV-1 感染后抗體水平分析
    4.7 PPMV-1 致病性分析
    4.8 PPMV-1 感染不同宿主后病毒分布的差異
    4.9 PPMV-1 與其他 NDV 的交叉保護(hù)反應(yīng)
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3424995