豬圓環(huán)病毒�。≒CVD）正嚴(yán)重危害世界養(yǎng)豬業(yè),其主要病原是豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）。PCV2引起仔豬免疫抑制是眾多細(xì)胞因子分泌紊亂的結(jié)果。豬肺泡巨噬細(xì)胞（PAMs）是重要的免疫細(xì)胞,也是PCV2的主要靶細(xì)胞。了解PCV2引起PAMs分泌細(xì)胞因子的變化及其調(diào)控途徑可為闡明PCV2致病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。試驗選取了20頭PCV2和豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）抗原抗體均為陰性的30日齡斷奶仔豬,無菌分離肺泡巨噬細(xì)胞（PAMs）,分為四組進(jìn)行體外培養(yǎng)：對照組,MyD88干擾組（干擾組）,PCV2感染組（PCV2組）,MyD88干擾-PCV2感染組（干擾-PCV2組）。用小干擾RNA（siRNA）方法干擾MyD88基因的表達(dá),并分別于PCV2作用后0 h、6 h、12 h、24 h和48 h收集細(xì)胞及培養(yǎng)上清液。熒光定量PCR法檢測干擾效率；ELISA方法檢測培養(yǎng)上清液中IL-1β、IL-6和IL-10的動態(tài)變化;間接免疫熒光（IFA）的方法檢測NF-κB/P65蛋白核易位的情況；western blot和法檢測胞核中NF-κB蛋白以及細(xì)胞漿內(nèi)MyD88、p-IκB和NF-κB/P65蛋白的... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
部分縮寫的中英文對照
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    引言
    第一章 PCV2與MYD88-NF-KB信號通路
        1 PCV2研究進(jìn)展
            1.1 PCV2的發(fā)現(xiàn)
            1.2 PCV2的病原特點
            1.3 PMWS
            1.4 PCV2對巨噬細(xì)胞的影響
        2 MYD88-NF-KB信號通路
            2.1 MyD88研究進(jìn)展
            2.2 MyD88和TLRs信號途徑
            2.3 NF-κB研究進(jìn)展
            2.4 巨噬細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子
        3 研究目的與意義
第二篇 試驗研究
    第二章 PCV2誘導(dǎo)體外培養(yǎng)PAMS分泌IL-1B、IL-6和IL-10信號途徑的研究
        1 材料與方法
            1.1 病毒
            1.2 主要儀器和試劑
            1.3 試驗動物
            1.4 試驗設(shè)計
            1.5 小干擾RNA方法沉默MYD88基因
            1.6 間接免疫熒光法檢測P65蛋白入核情況
            1.7 Western-blot法檢測胞漿中NF-κB/p65、p-IκBα、MyD88和胞核中NF-κB/p65蛋白的表達(dá)
            1.8 EMSA檢測NF-κB與DNA的結(jié)合率
            1.9 ELSA檢測IL-1β、IL-6和IL-10
            1.10 數(shù)據(jù)處理和分析
        2 結(jié)果
            2.1 PCV2誘導(dǎo)體外培養(yǎng)PAMs生成IL-1β
            2.2 PCV2引起體外培養(yǎng)PAMs分泌IL-6增加
            2.3 PCV2促進(jìn)體外培養(yǎng)PAMs分泌IL-10
            2.4 NF-κB/P65蛋白入核情況
            2.5 siRNA使MyD88基因沉默
            2.6 PCV2感染PAMs后引起MyD88蛋白表達(dá)量升高
            2.7 PCV2感染PAMs后引起胞漿中NF-κB/P65蛋白表達(dá)量降低
            2.8 PCV2感染PAMs后引起胞核中NF-κB/P65蛋白表達(dá)量升高
            2.9 PCV2感染PAMs后引起胞漿中p-IκB蛋白表達(dá)量升高
            2.10 PCV2對感染PAMs細(xì)胞核中NF-κB與DNA結(jié)合活性的影響
        3 討論
參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
碩士期間發(fā)表論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬圓環(huán)病毒2型對體外培養(yǎng)仔豬淋巴細(xì)胞NF-κB信號的動態(tài)影響[J]. 呂春子,代蕾,郭華,張書霞.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2013(05)
[2]PCV2感染對仔豬肝臟MyD88-NF-κB信號途徑的影響[J]. 張秀娟,孫運,郭華,張書霞.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2013(01)
[3]豬圓環(huán)病毒2型、豬巨細(xì)胞病毒和TTV-2混合感染的流行病學(xué)調(diào)查[J]. 劉捷,陸琪,王先煒,李玉峰,王曉曄,姜平.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2011(08)
[4]MyD88siRNA誘導(dǎo)豬調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞的實驗研究[J]. 周謙君,范慧敏,劉中民.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報. 2010(03)
[5]巨噬細(xì)胞介導(dǎo)PCV2誘導(dǎo)體外培養(yǎng)仔豬淋巴細(xì)胞凋亡的研究[J]. 華利忠,陳耿,張書霞.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2010(03)
[6]PCV-2感染仔豬淋巴結(jié)中的病毒定位與細(xì)胞凋亡[J]. 施旅娟,韓惠利,張書霞.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2008(01)
[7]PRRSV與PCV2體外共感染對豬肺泡巨噬細(xì)胞免疫學(xué)功能的影響[J]. 馮志新,姜平,王先煒,李玉峰.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2007(12)
[8]斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥的病理組織學(xué)觀察[J]. 韋英益,黃偉堅,尹業(yè)師,黃廣順,覃繼順.  廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué). 2007(S1)
[9]NF-kB與細(xì)胞凋亡[J]. 蘇劍東,吳靈飛.  世界華人消化雜志. 2007(12)
[10]轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的研究現(xiàn)狀及其應(yīng)用前景[J]. 史艷暉,盧圣棟.  中國生物工程雜志. 2007(04)



本文編號：3418387