豬圓環(huán)病毒�。≒CVD）正嚴重危害世界養(yǎng)豬業(yè),其主要病原是豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）。PCV2引起仔豬免疫抑制是眾多細胞因子分泌紊亂的結(jié)果。豬肺泡巨噬細胞（PAMs）是重要的免疫細胞,也是PCV2的主要靶細胞。了解PCV2引起PAMs分泌細胞因子的變化及其調(diào)控途徑可為闡明PCV2致病機制奠定基礎(chǔ)。試驗選取了20頭PCV2和豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）抗原抗體均為陰性的30日齡斷奶仔豬,無菌分離肺泡巨噬細胞（PAMs）,分為四組進行體外培養(yǎng)：對照組,MyD88干擾組（干擾組）,PCV2感染組（PCV2組）,MyD88干擾-PCV2感染組（干擾-PCV2組）。用小干擾RNA（siRNA）方法干擾MyD88基因的表達,并分別于PCV2作用后0 h、6 h、12 h、24 h和48 h收集細胞及培養(yǎng)上清液。熒光定量PCR法檢測干擾效率；ELISA方法檢測培養(yǎng)上清液中IL-1β、IL-6和IL-10的動態(tài)變化;間接免疫熒光（IFA）的方法檢測NF-κB/P65蛋白核易位的情況；western blot和法檢測胞核中NF-κB蛋白以及細胞漿內(nèi)MyD88、p-IκB和NF-κB/P65蛋白的... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
部分縮寫的中英文對照
第一篇 文獻綜述
    引言
    第一章 PCV2與MYD88-NF-KB信號通路
        1 PCV2研究進展
            1.1 PCV2的發(fā)現(xiàn)
            1.2 PCV2的病原特點
            1.3 PMWS
            1.4 PCV2對巨噬細胞的影響
        2 MYD88-NF-KB信號通路
            2.1 MyD88研究進展
            2.2 MyD88和TLRs信號途徑
            2.3 NF-κB研究進展
            2.4 巨噬細胞相關(guān)細胞因子
        3 研究目的與意義
第二篇 試驗研究
    第二章 PCV2誘導(dǎo)體外培養(yǎng)PAMS分泌IL-1B、IL-6和IL-10信號途徑的研究
        1 材料與方法
            1.1 病毒
            1.2 主要儀器和試劑
            1.3 試驗動物
            1.4 試驗設(shè)計
            1.5 小干擾RNA方法沉默MYD88基因
            1.6 間接免疫熒光法檢測P65蛋白入核情況
            1.7 Western-blot法檢測胞漿中NF-κB/p65、p-IκBα、MyD88和胞核中NF-κB/p65蛋白的表達
            1.8 EMSA檢測NF-κB與DNA的結(jié)合率
            1.9 ELSA檢測IL-1β、IL-6和IL-10
            1.10 數(shù)據(jù)處理和分析
        2 結(jié)果
            2.1 PCV2誘導(dǎo)體外培養(yǎng)PAMs生成IL-1β
            2.2 PCV2引起體外培養(yǎng)PAMs分泌IL-6增加
            2.3 PCV2促進體外培養(yǎng)PAMs分泌IL-10
            2.4 NF-κB/P65蛋白入核情況
            2.5 siRNA使MyD88基因沉默
            2.6 PCV2感染PAMs后引起MyD88蛋白表達量升高
            2.7 PCV2感染PAMs后引起胞漿中NF-κB/P65蛋白表達量降低
            2.8 PCV2感染PAMs后引起胞核中NF-κB/P65蛋白表達量升高
            2.9 PCV2感染PAMs后引起胞漿中p-IκB蛋白表達量升高
            2.10 PCV2對感染PAMs細胞核中NF-κB與DNA結(jié)合活性的影響
        3 討論
參考文獻
全文總結(jié)
碩士期間發(fā)表論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3418387