兔病毒性出血癥（Rabbit hemorrhagic disease,RHD）是由兔出血癥病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）引起的一種急性、高傳染性和致死性兔病,該病主要以呼吸系統(tǒng)出血、實(shí)質(zhì)器官淤血水腫、肝臟壞死、淤血及出血性變化為主要特征,嚴(yán)重危害著世界養(yǎng)兔業(yè)的發(fā)展。RHDV為單股正鏈RNA病毒,基因組全長(zhǎng)約7.5kb。目前RHDV在體外尚無(wú)穩(wěn)定分離培養(yǎng)的細(xì)胞系,嚴(yán)重影響著RHDV的細(xì)胞侵染機(jī)理和防控等方面的研究。為探索RHDV侵染機(jī)制,本研究通過(guò)酶消化法對(duì)乳兔脾臟原代細(xì)胞進(jìn)行了分離培養(yǎng)與建系,并進(jìn)行建系細(xì)胞的RHDV初步感染試驗(yàn),具體內(nèi)容如下:1、培養(yǎng)乳兔原代細(xì)胞的過(guò)程中,從脾臟組織中分離出一株成纖維型形態(tài)的細(xì)胞,命名為RS-17,通過(guò)對(duì)細(xì)胞傳代培養(yǎng)條件優(yōu)化、細(xì)胞標(biāo)志性蛋白檢測(cè)、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞核型以及細(xì)胞致瘤性等進(jìn)行測(cè)定,以對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)特性以及生物學(xué)特性進(jìn)行研究。結(jié)果顯示RS-17細(xì)胞具有血清依懶性、成纖維細(xì)胞標(biāo)志性蛋白檢測(cè)陽(yáng)性、具有正常的核型、無(wú)致瘤性,且目前細(xì)胞傳至95代仍可穩(wěn)定生長(zhǎng)。這為RHDV感染機(jī)制相關(guān)研究提供了細(xì)胞材料... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

脾臟原代細(xì)胞培養(yǎng)（100）

16E圖 2-2 RS-17 細(xì)胞形態(tài)（100 ）A：20 代；B：30 代；C：50 代；D：80 代；E：95 代Fig.2-2 Micrograph of RS-17 （100 ）A: Passages 20; B: Passages 30; C: Passages 50; D: Passages 80; E: Passages 97 的凍存與復(fù)蘇 細(xì)胞在經(jīng)過(guò)逐漸降溫法凍存于液氮后，第 3 天將其從液氮中取出過(guò)夜，細(xì)胞貼壁，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，與未凍存細(xì)胞生鋪滿(mǎn)瓶底，且能穩(wěn)定的繼續(xù)傳代培養(yǎng)。

懶性T 比色結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析如圖 2-3 所示，RS-17 細(xì)胞清的培養(yǎng)基中，細(xì)胞生長(zhǎng)較緩慢，有血清培養(yǎng)基對(duì)細(xì))，各血清含量的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞的促進(jìn)作用進(jìn)行比較清培養(yǎng)基相比促進(jìn)細(xì)胞增值作用無(wú)顯著性的差異（ 3%相比有極顯著促進(jìn)作用（P 0.01），5%、15%、顯著性差異（P 0.05），10%、15%、20%三者血清顯著性差異（P 0.05）。根據(jù)各濃度血清的促生長(zhǎng)作生長(zhǎng)的最優(yōu)血清濃度為 10%。


本文編號(hào)：3415206