近年來傳染性病毒性腺胃炎給養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的危害,在管理不善的養(yǎng)殖場,發(fā)病率大約在15%⁶0%,其可發(fā)生于不同品種的蛋雞和肉雞,并且流行范圍較廣。盡管病毒性腺胃炎危害嚴(yán)重,但其致病病原一直未有定論,據(jù)研究與呼腸孤病毒、網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒、腺病毒等病毒相關(guān)。在這種情況下,無法采用有效方法來防控傳染性病毒性腺胃炎的發(fā)生。2017年,李根在患有雞傳染性病毒性腺胃炎的病雞的腺胃中首次鑒定了圓圈病毒3型（Gyrovirus 3,GyV3）。通過回顧性流行病學(xué)調(diào)查及回歸動物實驗發(fā)現(xiàn)GyV3可以引起雞的免疫抑制及腺胃腫大,然而至今還沒有關(guān)于GyV3疫苗的研究,因此制備GyV3亞單位疫苗以及DNA疫苗進(jìn)行免疫原性研究,從而對動物進(jìn)行保護(hù)。GyV3屬于單鏈環(huán)狀DNA病毒,由三個開放閱讀框構(gòu)成,分別為衣殼蛋白VP1（1392bp）,骨架蛋白VP2（720bp）和凋亡蛋白VP3（378bp）。為獲得免疫原性強及效果好的疫苗,制備了亞單位疫苗和DNA疫苗。選取了VP1的第90位至463位氨基酸進(jìn)行表達(dá)用于制備亞單位疫苗;將VP1第90位至463位氨基酸與VP2通過柔性氨基酸linke... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

GyV3病毒基因組結(jié)構(gòu)示意圖(LiGenetal,2018)

V3 兩種亞單位疫苗免疫效果檢測結(jié)果V3 原核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定結(jié)果GyV3 為陽性的雞的腫大腺胃中提取 DNA 后利用上述設(shè)計的引和 VP190-463-linker-VP2 基因進(jìn)行 PCR 擴增，通過凝膠電泳結(jié)果顯示擴為 1122bp（圖 2A) 和 1842bp，其中 VP190-463-linker-VP2 基因的 VP1p (圖 2B），VP2 基因為 720bp(圖 2C），重疊延伸后為 1841bp(圖 2D的擴增出了目的基因。將克隆目的基因分別連接到原核表達(dá)載體 pET質(zhì)粒。用限制性內(nèi)切酶 SacI 和 NotI 對重組表達(dá)質(zhì)粒分別進(jìn)行酶切鑒果顯示重組表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功(圖 3)。

圖 3 重組質(zhì)粒的酶切鑒定Fig.3. The identification.of recombinant plasm190-463重組質(zhì)粒雙酶切鑒定 2, pET 32a-VP190-463-r; 1, the digested products of recombinant plas pET32a-VP190-463-linker-VP2.63-VP2 表達(dá)純化及 Western blot 驗證粒 pET32a-VP190-463與 ET32a-VP190-L 的 IPTG37 ℃分別誘導(dǎo)表達(dá) 4h 和 尿素梯度純化法進(jìn)行蛋白的純化析(圖 4A），預(yù)期大小約 60 kD 與達(dá)蛋白，經(jīng)過純化后的蛋白具有較


本文編號：3408534