發(fā)布時間：2021-09-22 23:48

　　流感病毒分為A、B、C三個屬，唯有A型流感病毒屬的病毒能引起流感大流行。低致病性H6亞型禽流感病毒在北美和亞洲鳥群中普遍存在，而且其感染宿主范圍很廣，能夠直接感染雞、小鼠和水貂等，甚至有感染人的報道，其流行和傳播趨勢呈上升趨勢，對人類健康和公共衛(wèi)生安全構成潛在威脅。目前，國內外對人流感病毒、H5N1亞型高致病性禽流感病毒和H9N2亞型禽流感病毒研究較多，而對H6亞型低致病性禽流感病毒的研究相對較少，人們往往會因為其對禽的低致病性，而忽略其對人類健康的潛在危害性。H6亞型禽流感病毒A/teal/HongKong/W312/97（tl/HK/97）與1997年大流行的H5N1流感病毒有很高的同源性，這說明低致病性的H6亞型的流感病毒具有與其它亞型的流感病毒發(fā)生重配，且能突破物種的種間障礙在人群大流行的潛在能力。本研究重點探討了H6亞型低致病性禽流感病毒對哺乳動物的致病性、在哺乳動物間進行水平傳播的能力以及致病性變異的分子機制。首先，我們對本實驗室保存的一株野鴨源A/H6N1亞型禽流感病毒（A/Mallard/SanJiang/275/2007，簡稱A/H6N1）進行全基因組測序和遺傳進化分... 

【文章來源】：石河子大學新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 流感病毒的概況
        1.1.1 流感病毒的結構和分類
        1.1.2 流感病毒大流行
        1.1.3 流感病毒感染的宿主范圍
    1.2 流感病毒的基因重配
    1.3 流感病毒的致病性
        1.3.1 血凝素
        1.3.2 聚合酶蛋白
        1.3.3 非結構蛋白
    1.4 H6亞型流感病毒的現(xiàn)狀
第二章 野鴨源H6N1亞型禽流感病毒SJ275株遺傳進化分析和生物學特性研究
    實驗一 野鴨源H6N1亞型禽流感病毒SJ275株遺傳進化分析
        1.1 材料與方法
            1.1.1 毒株
            1.1.2 菌種、雞胚和小鼠
            1.1.3 主要試劑、儀器
            1.1.4 A/H6N1禽流感病毒全長引物的設計
            1.1.5 目標片段的克隆與擴增
            1.1.6 重組質粒的鑒定
        1.2 結果
            1.2.1 病毒DNAPCR擴增結果
            1.2.2 H6N1亞型AIV全基因序列
                1.2.2.1 PB2序列
                1.2.2.2 PB1序列
                1.2.2.3 PA序列
                1.2.2.4 HA序列
                1.2.2.5 NP序列
                1.2.2.6 NA序列
                1.2.2.7 M序列
                1.2.2.8 NS序列
            1.2.3 H6N1亞型AIV全基因進化樹分析結果
        1.3 討論
    實驗二 野鴨源H6N1亞型禽流感病毒SJ275株對BALB/c小鼠的致病性研究
        2.1 材料與方法
            2.1.1 毒株
            2.1.2 實驗動物
            2.1.3 主要試劑和儀器
            2.1.4 病毒的純化及富集
            2.1.5 雞胚半數(shù)感染量(EID50)測定
            2.1.6 A/H6N1對BALB/c小鼠的致病性研究
        2.2 結果
            2.2.1 雞胚半數(shù)感染量(EID50)
            2.2.2 小鼠臨床癥狀及體重變化情況
            2.2.3 小鼠半數(shù)致死量(MLD50)
            2.2.4 病毒在小鼠體內復制水平檢測
            2.2.5 小鼠血清HI抗體水平檢測結果
            2.2.6 小鼠各臟器病理學切片檢測結果
        2.3 討論
    實驗三 野鴨源H6N1亞型禽流感病毒SJ275株對犬的致病性研究
        3.1 材料與方法
            3.1.1 毒株
            3.1.2 實驗動物
            3.1.3 A/H6N1對犬的致病性研究
        3.2 結果
            3.2.1 接種組和非接種組體溫變化情況
            3.2.2 攻毒后肺臟病毒分布情況
            3.2.3 攻毒后犬排毒情況評估
            3.2.4 病理切片及免疫組化情況
            3.2.5 抗體水平檢測
        3.3 討論
第三章 A/H6N1與A/H1N1在哺乳動物體內的重配及重配病毒的傳播性研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 毒株
        3.1.2 實驗動物
        3.1.3 主要試劑、儀器
        3.1.4 A/H6N1與A/H1N1的特異鑒定引物的設計合成
        3.1.5 重配病毒的獲得
        3.1.6 體外拯救相關的H6亞型的重配病毒
        3.1.7 重配病毒的傳播能力的評估
    3.2 結果
        3.2.1 A/H6N1與A/H1N1EID50的測定結果
        3.2.2 A/H6N1與A/H1N1混合感染豚鼠病毒復制情況評估
        3.2.3 鼻洗液噬斑純化的鑒定結果
        3.2.4 重配病毒的分離及鑒定結果
        3.2.5 重配病毒傳播特性的評估
        3.2.6 抗體水平檢測
        3.2.7 4株H6亞型重配病毒受體結合特異性結果
    3.3 討論
第四章 A/H6N1流感病毒致病性變異分子機制研究
    實驗一 A/H6N1流感病毒在小鼠肺內的適應性傳代
        1.1 材料與方法
            1.1.1 毒株
            1.1.2 實驗動物
            1.1.3 主要試劑和儀器
            1.1.4 A/H6N1流感病毒變異株的獲得
            1.1.5 3株A/H6N1流感病毒變異株病毒的富集
            1.1.6 3株A/H6N1流感病毒變異株EID50的測定
            1.1.7 3株A/H6N1流感病毒變異株致病性研究
        1.2 結果
            1.2.1 雞胚半數(shù)感染量(EID50)
            1.2.2 小鼠半數(shù)死亡量(MLD50)
            1.2.3 小鼠體重變化情況
            1.2.4 病毒在小鼠體內復制水平檢測
            1.2.5 小鼠血清HI抗體水平檢測結果
            1.2.6 小鼠各臟器病理學切片檢測結果
        1.3 討論
    實驗二 野鴨源A/H6N1亞型禽流感病毒SJ275株反向遺傳操作系統(tǒng)的建立
        2.1 材料與方法
            2.1.1 毒株與質粒
            2.1.2 菌種、細胞、雞胚和小鼠
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 反向遺傳引物的設計合成
            2.1.5 轉染質粒的構建
            2.1.6 轉染質粒的提取
            2.1.7 轉染質粒的鑒定
            2.1.8 病毒的拯救
            2.1.9 拯救病毒測序鑒定
            2.1.10 拯救病毒雞胚半數(shù)感染量(EID50)測定
            2.1.11 rA/H6N1對BALB/c小鼠致病性實驗
        2.2 結果
            2.2.1 A/H6N1亞型禽流感病毒RT-PCR擴增產(chǎn)物的鑒定結果
            2.2.2 拯救病毒rA/H6N1測序鑒定結果
            2.2.3 拯救病毒rA/H6N1EID50測定結果
            2.2.4 拯救病毒rA/H6N1MLD50測定結果
            2.2.5 rA/H6N1感染小鼠的發(fā)病率和死亡率
            2.2.6 各組織病毒滴定結果
            2.2.7 病理組織變化結果
            2.2.8 小鼠血清HI抗體水平檢測結果
        2.3 討論
    實驗三 A/H6N1流感病毒致病力變異分子機制研究
        3.1 材料與方法
            3.1.1 毒株
            3.1.2 實驗動物
            3.1.3 主要試劑和儀器
            3.1.4 3株A/H6N1流感病毒變異株相關氨基酸位點的初步篩選
            3.1.5 變異株A/H6N1-P8M3毒力標記的篩選
            3.1.6 變異株相關病毒的致病性研究
            3.1.7 變異株相關病毒各臟器組織嗜性的滴定
            3.1.8 病理學切片觀察
            3.1.9 HI抗體水平檢測
            3.1.10 7株A/H6N1亞型流感病毒復制動力學的測定
        3.2 結果
            3.2.1 3株A/H6N1流感病毒變異株的變異位點
            3.2.2 拯救病毒測序鑒定結果
            3.2.3 拯救病毒的EID50
            3.2.4 拯救病毒的MLD50
            3.2.5 感染小鼠死亡率
            3.2.6 感染組小鼠的體重變化情況
            3.2.7 組織嗜性情況
            3.2.8 小鼠血清HI抗體水平檢測結果
            3.2.9 病理及免疫組化
            3.2.10 7株A/H6N1亞型流感病毒復制動力學結果
        3.3 討論
參考文獻
創(chuàng)新和特色
結論
致謝
導師簡介
作者簡介及在學期間所取得的科研成果
導師評閱表



本文編號：3404598