流感病毒分為A、B、C三個(gè)屬，唯有A型流感病毒屬的病毒能引起流感大流行。低致病性H6亞型禽流感病毒在北美和亞洲鳥(niǎo)群中普遍存在，而且其感染宿主范圍很廣，能夠直接感染雞、小鼠和水貂等，甚至有感染人的報(bào)道，其流行和傳播趨勢(shì)呈上升趨勢(shì)，對(duì)人類健康和公共衛(wèi)生安全構(gòu)成潛在威脅。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)人流感病毒、H5N1亞型高致病性禽流感病毒和H9N2亞型禽流感病毒研究較多，而對(duì)H6亞型低致病性禽流感病毒的研究相對(duì)較少，人們往往會(huì)因?yàn)槠鋵?duì)禽的低致病性，而忽略其對(duì)人類健康的潛在危害性。H6亞型禽流感病毒A/teal/HongKong/W312/97（tl/HK/97）與1997年大流行的H5N1流感病毒有很高的同源性，這說(shuō)明低致病性的H6亞型的流感病毒具有與其它亞型的流感病毒發(fā)生重配，且能突破物種的種間障礙在人群大流行的潛在能力。本研究重點(diǎn)探討了H6亞型低致病性禽流感病毒對(duì)哺乳動(dòng)物的致病性、在哺乳動(dòng)物間進(jìn)行水平傳播的能力以及致病性變異的分子機(jī)制。首先，我們對(duì)本實(shí)驗(yàn)室保存的一株野鴨源A/H6N1亞型禽流感病毒（A/Mallard/SanJiang/275/2007，簡(jiǎn)稱A/H6N1）進(jìn)行全基因組測(cè)序和遺傳進(jìn)化分... 

【文章來(lái)源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：107 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 流感病毒的概況
        1.1.1 流感病毒的結(jié)構(gòu)和分類
        1.1.2 流感病毒大流行
        1.1.3 流感病毒感染的宿主范圍
    1.2 流感病毒的基因重配
    1.3 流感病毒的致病性
        1.3.1 血凝素
        1.3.2 聚合酶蛋白
        1.3.3 非結(jié)構(gòu)蛋白
    1.4 H6亞型流感病毒的現(xiàn)狀
第二章 野鴨源H6N1亞型禽流感病毒SJ275株遺傳進(jìn)化分析和生物學(xué)特性研究
    實(shí)驗(yàn)一 野鴨源H6N1亞型禽流感病毒SJ275株遺傳進(jìn)化分析
        1.1 材料與方法
            1.1.1 毒株
            1.1.2 菌種、雞胚和小鼠
            1.1.3 主要試劑、儀器
            1.1.4 A/H6N1禽流感病毒全長(zhǎng)引物的設(shè)計(jì)
            1.1.5 目標(biāo)片段的克隆與擴(kuò)增
            1.1.6 重組質(zhì)粒的鑒定
        1.2 結(jié)果
            1.2.1 病毒DNAPCR擴(kuò)增結(jié)果
            1.2.2 H6N1亞型AIV全基因序列
                1.2.2.1 PB2序列
                1.2.2.2 PB1序列
                1.2.2.3 PA序列
                1.2.2.4 HA序列
                1.2.2.5 NP序列
                1.2.2.6 NA序列
                1.2.2.7 M序列
                1.2.2.8 NS序列
            1.2.3 H6N1亞型AIV全基因進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果
        1.3 討論
    實(shí)驗(yàn)二 野鴨源H6N1亞型禽流感病毒SJ275株對(duì)BALB/c小鼠的致病性研究
        2.1 材料與方法
            2.1.1 毒株
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.3 主要試劑和儀器
            2.1.4 病毒的純化及富集
            2.1.5 雞胚半數(shù)感染量(EID50)測(cè)定
            2.1.6 A/H6N1對(duì)BALB/c小鼠的致病性研究
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 雞胚半數(shù)感染量(EID50)
            2.2.2 小鼠臨床癥狀及體重變化情況
            2.2.3 小鼠半數(shù)致死量(MLD50)
            2.2.4 病毒在小鼠體內(nèi)復(fù)制水平檢測(cè)
            2.2.5 小鼠血清HI抗體水平檢測(cè)結(jié)果
            2.2.6 小鼠各臟器病理學(xué)切片檢測(cè)結(jié)果
        2.3 討論
    實(shí)驗(yàn)三 野鴨源H6N1亞型禽流感病毒SJ275株對(duì)犬的致病性研究
        3.1 材料與方法
            3.1.1 毒株
            3.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            3.1.3 A/H6N1對(duì)犬的致病性研究
        3.2 結(jié)果
            3.2.1 接種組和非接種組體溫變化情況
            3.2.2 攻毒后肺臟病毒分布情況
            3.2.3 攻毒后犬排毒情況評(píng)估
            3.2.4 病理切片及免疫組化情況
            3.2.5 抗體水平檢測(cè)
        3.3 討論
第三章 A/H6N1與A/H1N1在哺乳動(dòng)物體內(nèi)的重配及重配病毒的傳播性研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 毒株
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.3 主要試劑、儀器
        3.1.4 A/H6N1與A/H1N1的特異鑒定引物的設(shè)計(jì)合成
        3.1.5 重配病毒的獲得
        3.1.6 體外拯救相關(guān)的H6亞型的重配病毒
        3.1.7 重配病毒的傳播能力的評(píng)估
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 A/H6N1與A/H1N1EID50的測(cè)定結(jié)果
        3.2.2 A/H6N1與A/H1N1混合感染豚鼠病毒復(fù)制情況評(píng)估
        3.2.3 鼻洗液噬斑純化的鑒定結(jié)果
        3.2.4 重配病毒的分離及鑒定結(jié)果
        3.2.5 重配病毒傳播特性的評(píng)估
        3.2.6 抗體水平檢測(cè)
        3.2.7 4株H6亞型重配病毒受體結(jié)合特異性結(jié)果
    3.3 討論
第四章 A/H6N1流感病毒致病性變異分子機(jī)制研究
    實(shí)驗(yàn)一 A/H6N1流感病毒在小鼠肺內(nèi)的適應(yīng)性傳代
        1.1 材料與方法
            1.1.1 毒株
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.3 主要試劑和儀器
            1.1.4 A/H6N1流感病毒變異株的獲得
            1.1.5 3株A/H6N1流感病毒變異株病毒的富集
            1.1.6 3株A/H6N1流感病毒變異株EID50的測(cè)定
            1.1.7 3株A/H6N1流感病毒變異株致病性研究
        1.2 結(jié)果
            1.2.1 雞胚半數(shù)感染量(EID50)
            1.2.2 小鼠半數(shù)死亡量(MLD50)
            1.2.3 小鼠體重變化情況
            1.2.4 病毒在小鼠體內(nèi)復(fù)制水平檢測(cè)
            1.2.5 小鼠血清HI抗體水平檢測(cè)結(jié)果
            1.2.6 小鼠各臟器病理學(xué)切片檢測(cè)結(jié)果
        1.3 討論
    實(shí)驗(yàn)二 野鴨源A/H6N1亞型禽流感病毒SJ275株反向遺傳操作系統(tǒng)的建立
        2.1 材料與方法
            2.1.1 毒株與質(zhì)粒
            2.1.2 菌種、細(xì)胞、雞胚和小鼠
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 反向遺傳引物的設(shè)計(jì)合成
            2.1.5 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.1.6 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的提取
            2.1.7 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的鑒定
            2.1.8 病毒的拯救
            2.1.9 拯救病毒測(cè)序鑒定
            2.1.10 拯救病毒雞胚半數(shù)感染量(EID50)測(cè)定
            2.1.11 rA/H6N1對(duì)BALB/c小鼠致病性實(shí)驗(yàn)
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 A/H6N1亞型禽流感病毒RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的鑒定結(jié)果
            2.2.2 拯救病毒rA/H6N1測(cè)序鑒定結(jié)果
            2.2.3 拯救病毒rA/H6N1EID50測(cè)定結(jié)果
            2.2.4 拯救病毒rA/H6N1MLD50測(cè)定結(jié)果
            2.2.5 rA/H6N1感染小鼠的發(fā)病率和死亡率
            2.2.6 各組織病毒滴定結(jié)果
            2.2.7 病理組織變化結(jié)果
            2.2.8 小鼠血清HI抗體水平檢測(cè)結(jié)果
        2.3 討論
    實(shí)驗(yàn)三 A/H6N1流感病毒致病力變異分子機(jī)制研究
        3.1 材料與方法
            3.1.1 毒株
            3.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            3.1.3 主要試劑和儀器
            3.1.4 3株A/H6N1流感病毒變異株相關(guān)氨基酸位點(diǎn)的初步篩選
            3.1.5 變異株A/H6N1-P8M3毒力標(biāo)記的篩選
            3.1.6 變異株相關(guān)病毒的致病性研究
            3.1.7 變異株相關(guān)病毒各臟器組織嗜性的滴定
            3.1.8 病理學(xué)切片觀察
            3.1.9 HI抗體水平檢測(cè)
            3.1.10 7株A/H6N1亞型流感病毒復(fù)制動(dòng)力學(xué)的測(cè)定
        3.2 結(jié)果
            3.2.1 3株A/H6N1流感病毒變異株的變異位點(diǎn)
            3.2.2 拯救病毒測(cè)序鑒定結(jié)果
            3.2.3 拯救病毒的EID50
            3.2.4 拯救病毒的MLD50
            3.2.5 感染小鼠死亡率
            3.2.6 感染組小鼠的體重變化情況
            3.2.7 組織嗜性情況
            3.2.8 小鼠血清HI抗體水平檢測(cè)結(jié)果
            3.2.9 病理及免疫組化
            3.2.10 7株A/H6N1亞型流感病毒復(fù)制動(dòng)力學(xué)結(jié)果
        3.3 討論
參考文獻(xiàn)
創(chuàng)新和特色
結(jié)論
致謝
導(dǎo)師簡(jiǎn)介
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
導(dǎo)師評(píng)閱表



本文編號(hào)：3404598