副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis,HPS）是豬上呼吸道的一種共棲菌,以多發(fā)性漿膜炎、關節(jié)炎和腦膜炎為主要特征。外膜蛋白P2（Omp P2）是HPS外膜中最豐富的蛋白,能誘導宿主的炎癥反應。序列分析發(fā)現(xiàn)HPS Omp P2蛋白表面由8或9個表面環(huán)狀結構（loop）組成,推測loop（s）參與了Omp P2誘導的炎癥反應。本研究以HPS強毒SC096菌株Omp P2和Omp P2 loops L1-L8為研究對象,體外刺激豬肺泡巨噬細胞（PAMs）,檢測loop誘導的細胞因子的種類和表達水平,研究loop肽段在Omp P2誘導炎癥反應中的作用;通過分析TLR/NF-κB和MAPK通路中關鍵蛋白分子的表達,探索loop肽段在Omp P2誘導炎癥反應中的分子機制。取得的結果如下:1.loops L7和L8參與HPS Omp P2誘導細胞因子的表達為了研究OmpP2和OmpP2 loops L1-L8能否誘導細胞因子的表達,我們通過提取HPS Omp P2以及合成Omp P2 loops L1-L8刺激PAMs,分別在刺激6 h和12 h后收集樣本進行Real-time P... 

【文章來源】：西南民族大學四川省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

ompP2ΔLoop7和ompP2ΔLoop8基因缺失株構建示意圖

副豬嗜血桿菌OmpP2及其Loop誘導細胞因子的作用及機制研究282.2.9HPSloop氨基酸序列進行分析HPS參考菌株15個血清型的OmpP2蛋白質序列來自NCBI（www.ncbi.nlm.nih.gov）。使用CLCSequenceViewer8.0進行l(wèi)oopsL7和L8的氨基酸序列的比較。2.2.10數(shù)據(jù)分析使用IBMSPSSStatistics26.0統(tǒng)計軟件程序的一般線性模型程序對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（ANOVA）。Duncan的多重比較測試用于識別群體平均值之間的差異。P<0.05被認為具有統(tǒng)計學意義。2.3結果2.3.1HPSOmpP2的提取使用報道的方法（Zhangetal.,2013），從HPS中提取并純化天然的OmpP2蛋白。將純化的OmpP2蛋白進行徹底透析，并通過用硝酸銀染色的SDS-PAGE凝膠顯示LPS污染，并通過鱟變形細胞裂解物測定法進一步評估。通過12％SDS-PAGE分析蛋白質，通過考馬斯藍染色顯現(xiàn)，并通過MALDI-TOF-TOF方法鑒定（圖2）。結果表明純化的蛋白質是HPSOmpP2蛋白。圖2.HPSSC096菌株OmpP2的SDS-PAGE電泳圖M，蛋白質標準分子量Figure2.OmpP2SDS-PAGEelectrophoresismapoftheH.parasuisSC096strainmakerLaneM,Proteinstandardmolecularmaker2.3.2HPSOmpP2和loopsL1-L8對細胞活力的影響

副豬嗜血桿菌OmpP2及其Loop誘導細胞因子的作用及機制研究31圖3.HPSOmpP2和loops刺激PAMs6h和12h后細胞因子IL-1α（A），IL-1β（B），IL-6（C），IL-8（D），IL-17（E），IL-23（F），CCL-4（G）和CCL-5（H）mRNA轉錄水平*代表與陰性對照組相比差異顯著（P<0.05），**代表與陰性對照組相比差異極顯著（P<0.01）Figure3.ThemRNAexpressionofIL-1α(A),IL-1β(B),IL-6(C),IL-8(D),IL-17(E),IL-23(F),CCL-4(G)andCCL-5(H)inPAMswasstimulatedbyH.parasuisOmpP2andtheloopsfor6and12h*representsignificantdifference(P<0.05)whencomparedwiththethenegativecontrol,**representextremelysignificantdifference(P<0.01)whencomparedwiththethenegativecontrol

【參考文獻】：
期刊論文
[1]固有免疫相關模式識別受體研究進展[J]. 何邵平,賀建華,陳佳億,陳福,歐淑琦.  動物營養(yǎng)學報. 2017(11)
[2]HPS OmpP2膜外結構環(huán)誘導PAMs IL-8 mRNA轉錄的研究[J]. 羅銀珠,賀現(xiàn)輝,周素明,馮賽祥,姚文鳳,徐成剛,廖明,辛朝安.  中國獸醫(yī)雜志. 2015(10)
[3]副豬嗜血桿菌主要外膜蛋白基因研究進展[J]. 張斌,湯承,岳華.  動物醫(yī)學進展. 2013(01)
[4]副豬嗜血桿菌ompP2基因的結構特征及其與毒力的聯(lián)系[J]. 趙倩,湯承,楊發(fā)龍,邵國青,岳華.  中國科學:生命科學. 2010(06)
[5]炎性細胞因子在細菌感染中的作用[J]. 石云峰,吳本權.  國際內科學雜志. 2009(02)

博士論文
[1]副豬嗜血桿菌感染致炎癥相關信號通路的研究[D]. 陳雨珊.華中農業(yè)大學 2016

碩士論文
[1]副豬嗜血桿菌ompP2基因的結構特征及其功能的研究[D]. 趙倩.西南民族大學 2011



本文編號：3402865