OrfV（Orf virus,OrfV）屬于痘病毒科、副痘病毒屬成員,為有囊膜線性雙股DNA病毒,是引起綿羊、山羊發(fā)生以口唇、舌、鼻、乳房等部位皮膚、黏膜形成丘疹、膿皰、潰瘍以及形成疣狀結(jié)痂為主要特征的接觸性、嗜上皮性、人獸共患傳染病病原。國內(nèi)外的研究已證明該病毒是一種變異性較強(qiáng)的病毒,不同國家和地區(qū)分離的病毒在致病性上存在著較大差異,基因組限制性酶切圖譜分析表明也存在差異。可以持續(xù)增殖病毒的細(xì)胞是研究病毒最重要的工具之一。羔羊或犢牛睪丸細(xì)胞是OrfV增殖的易感細(xì)胞,但獲得受來源限制,且原代細(xì)胞存在獲取過程復(fù)雜及大量使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物;OrfV在傳代細(xì)胞上的培養(yǎng),存在傳代后毒力減弱、細(xì)胞病變（CPE）不穩(wěn)定性等問題,因此羊口瘡病毒體外增殖是一個(gè)重要技術(shù)瓶頸,直接影響了對OrfV生物學(xué)特性進(jìn)行基礎(chǔ)研究和實(shí)踐中OrfV相關(guān)生物制品的開發(fā)。為了獲得OrfV地方流行毒株,為OrfV基礎(chǔ)研究和疫苗生產(chǎn)提供資料而開展了以下研究:1.羊口瘡病毒大足株（OrfV-DZ）的分離與鑒定本研究采集重慶榮昌、大足等地區(qū)多個(gè)羊場疑似羊口瘡病料18份,提取DNA,PCR鑒定為陽性病料常規(guī)處理,接種羔羊睪丸細(xì)胞（LT）進(jìn)... 

【文章來源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

臨床癥狀A(yù)：口唇部痂皮；B：增生的肉芽組織

床樣本 PCR 檢測結(jié)果重慶地區(qū)大足、榮昌、永川等羊場共采集 18 份臨床樣品，提取病料 DN室設(shè)計(jì)的 B2L 基因特異性引物，進(jìn)行 PCR 檢測，共有 11 份樣品擴(kuò)增出大p 的目的條帶（圖 1-2），陽性率為 61.1%(11/18)。圖 1-1 臨床癥狀A(yù)： 口唇部痂皮；B：增生的肉芽組織Fig.1-1 Clinical symptomsA: Molar skin; B: Hyperplastic granulation tissue

3.4 細(xì)胞培養(yǎng)物第 5 代 TCID50值測定結(jié)果取引起羔羊睪丸細(xì)胞產(chǎn)生典型細(xì)胞病變的第 5 代病毒液 100 μL，按照 10-1~10-9進(jìn)行連續(xù)稀釋后，接種到山羊睪丸細(xì)胞上，測定其 TCID50（表 1-5）。根據(jù) Reed-Muench 法，計(jì)算出第 5 代細(xì)胞培養(yǎng)物病毒滴度為 10-5.68TCID50/0.1mL。病毒液稀釋度出現(xiàn) CPE孔數(shù)未出現(xiàn)CPE 孔數(shù)累計(jì) 出現(xiàn) CPE 孔數(shù)所出現(xiàn) CPE占的比例孔數(shù)未出現(xiàn)CPE孔數(shù)表 1-5 第 5 代 OrfV-DZ 分離株 TCID50 的測定Tab. 1-5 Titration of P5 OrfV-DZ strain圖 1-3 細(xì)胞病變觀察結(jié)果Fig. 1-3 Observation of cell lesionsA：正常羔羊睪丸細(xì)胞；B：36h；C：72hA:Normal cell；B：36h；C：72h

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[5]宿主凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白在羊口瘡病毒致炎中的作用研究[D]. 張凱照.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[6]陜西白絨山羊和奶山羊羊口瘡病原調(diào)查及滅活疫苗免疫效果評估[D]. 李雯麗.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[7]羊口瘡病毒文登株和石林株毒力致弱及毒力相關(guān)基因的生物信息學(xué)分析[D]. 周銘.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[8]羊傳染性膿皰病毒VIR蛋白對宿主細(xì)胞p53和IFN-α的調(diào)控[D]. 王玲玲.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[9]羊口瘡病毒和山羊痘病毒的分離鑒定及羊口瘡病毒B2L蛋白單克隆抗體的研制[D]. 朱相儒.揚(yáng)州大學(xué) 2016
[10]不同地區(qū)羊口瘡病毒三個(gè)主要結(jié)構(gòu)蛋白基因的遺傳進(jìn)化分析[D]. 李浩.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



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