乳汁是哺乳動物新生兒最重要的營養(yǎng)和被動免疫來源,富含多種免疫成分,能夠滿足嬰幼兒大腦發(fā)育、生長以及健康免疫系統(tǒng)的各種需求。動物體液中的microRNA （miRNA）通常被選擇性地包裹在exosome中。Exosome是由很多種類的細胞所分泌的一種帶膜囊泡,這些exosome中的miRNAs能夠被主動地定向輸送到受體細胞,并調(diào)節(jié)靶基因的表達和受體細胞的功能。本研究中,利用原子力顯微鏡（Atomic force microscope, AFM）證實豬乳汁中大量存在exosome的基礎上,構(gòu)建了約克夏豬整個泌乳期內(nèi)（從初生到28日齡）6個不同泌乳階段（出生后0、3、7、14、21和28d）乳汁exosome small RNA文庫,以出生后0d和3d的乳汁作為初乳,其他日齡的乳汁作為常乳進行對比性分析,用高通量測序的方法分析和注解了初乳（0d和3d）和常乳（7、14、21和28d）exosome中的miRNA表達譜,篩選與免疫密切相關(guān)的miRNA,分析其在不同環(huán)境下的耐受（穩(wěn)定）性；對免疫相關(guān)的miRNA在僅初乳和僅常乳喂養(yǎng)的仔豬體內(nèi)的差異表達進行研究，通過仔豬活體模型研究以評估其在仔豬生... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1 Exosome與細胞外小泡體(EVs)
        1.1 EVs的研究進展
        1.2 人類體液中的EVs
        1.3 EVs的形成和分泌
        1.4 EVs的分離與鑒定
        1.5 細胞釋放的小泡體的分類與特性
        1.6 EVs的功能
        1.7 人類醫(yī)學中EVs的應用
        1.8 關(guān)于EVs研究存在的問題及未來發(fā)展方向
    2 miRNA與免疫調(diào)控
        2.1 miRNA概況
        2.2 細胞外miRNA的發(fā)現(xiàn)
        2.3 細胞外miRNA的存在形式
        2.4 細胞釋放miRNA的選擇性
        2.5 細胞外miRNA的生物學功能
        2.6 乳汁中的miRNA與免疫調(diào)節(jié)
    3 本研究的目的及意義
第二章 材料與方法
    1 實驗豬只和乳汁收集
        1.1 實驗豬只的選擇
        1.2 乳汁采樣時間的確定
        1.3 乳汁的收集
    2 乳汁exosome的AFM檢測
        2.1 乳汁exosome的制備
        2.2 乳汁exosome的AFM檢測
    3 乳汁exosome中RNA的抽提和分析
        3.1 乳汁exosome中RNA的抽提
        3.2 乳汁exosome中RNA的質(zhì)量分析
    4 Small RNA測序及其功能與表達譜分析
        4.1 乳汁樣品的分組和small RNA文庫的構(gòu)建
        4.2 Small RNA測序
        4.3 測序數(shù)據(jù)處理
        4.4 miRNA的預測和挖掘
        4.5 miRNA的表達特性和表達譜分析
    5 各泌乳階段特異性高豐度miRNAs表達水平的q-PCR定量檢測
        5.1 q-PCR的檢測方法
        5.2 miRNA的表達水平分析
        5.3 高豐度miRNAs在不同泌乳期乳汁中的表達量差異分析
    6 豬乳汁exosome中miRNAs的穩(wěn)定性分析
        6.1 極端環(huán)境條件處理
        6.2 miRNA表達水平的q-PCR定量檢測
        6.3 統(tǒng)計分析和顯著性檢驗
    7 飼喂初乳和常乳對仔豬的影響
        7.1 實驗仔豬的選擇
        7.2 飼養(yǎng)實驗
        7.3 血液代謝指標和miRNA表達量分析
        7.4 統(tǒng)計分析和顯著性檢驗
第三章 結(jié)果與分析
    1 豬乳汁中exosome的分離和檢測
        1.1 乳汁exosome的制備
        1.2 乳汁exosome的AFM檢測
        1.3 乳汁exosome的形態(tài)測定
    2 豬乳汁exosome中RNA的抽提和分析
        2.1 豬乳汁exosome中RNA的抽提
        2.2 豬乳汁exosome中的RNA分析
    3 豬乳汁exosome中miRNAs的分析鑒定
        3.1 豬乳汁exosome中small RNA文庫的構(gòu)建
        3.2 豬乳汁exosome中small RNA測序原始讀數(shù)讀取
        3.3 豬乳汁exosome small RNA文庫的可定位讀數(shù)的獲取
        3.4 豬乳汁exosome中miRNA的鑒定和預測
        3.5 豬乳汁exosome中miRNA的同源性分析
        3.6 豬乳汁exosome中泌乳相關(guān)miRNA的表達譜和功能分析
    4 Exosome中免疫相關(guān)miRNA在初乳和常乳間的表達差異
    5 乳汁exosome來源miRNAs的抗降解能力和穩(wěn)定性分析
    6 免疫相關(guān)miRNAs在僅喂初乳和僅喂常乳仔豬血液中的表達差異
        6.1 飼喂初乳對仔豬血液代謝指標的影響
        6.2 飼喂初乳對仔豬血液中免疫相關(guān)miRNAs表達量的影響
第四章 討論
    1 關(guān)于豬乳汁exosome
    2 關(guān)于miRNA和豬乳汁exosome miRNAs
    3 相對基因芯片和q-PCR技術(shù),高通量測序技術(shù)在mi RNAs挖掘研究中的前景與局限性
    4 關(guān)于exosome miRNA直接通過乳汁經(jīng)消化道由母體傳遞給仔豬
    5 豬具有作為理想動物模型的優(yōu)勢
    6 關(guān)于miR-148a功能的相關(guān)研究
    7 乳汁中miRNA的篩選及其功能研究
第五章 結(jié)論
論文創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
附錄
攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文



本文編號：3401508