單鏈抗體（single-chain antibody fragment，ScFv）是基因工程方法制備的小分子抗體，由彈性連接肽將抗體的重鏈可變區(qū)與輕鏈可變區(qū)連接而成的重組抗體。其不含有抗體分子的恒定區(qū)片段，因而免疫原性弱，使抗體的作用更集中于靶細(xì)胞部位，實體組織穿透力強(qiáng)，血漿半衰期短等，在臨床診斷及治療中具有重要的應(yīng)用價值。本研究選擇豬流感病毒A/Swine/Guangdong/2004（H1N1）和禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96（H5N1）毒株分別作為抗H1亞型和H5亞型單抗制備的免疫原，將其HA基因克隆到真核表達(dá)載體pVAX1中構(gòu)建了重組質(zhì)粒pVAX1-HA1和pVAX1-HA5。使用純化的pVAX1-HA1、pVAX1-HA5和全病毒滅活抗原H1N1、H5N1分別免疫5周齡Balb/c小鼠，通過純化的病毒GD/04（H1N1）和GD/1/96（H5N1）作為ELISA反應(yīng)的包被抗原，篩選出陽性克隆。經(jīng)過四輪亞克隆，共獲得12株抗H1N1流感病毒的單抗和23株抗H5N1流感病毒的單抗。然后，對ELISA實驗為陽性的樣本再進(jìn)行中和實驗篩選，最終得到4株ELIS... 

【文章來源】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

單鏈抗體結(jié)構(gòu)示意圖

%CO2培養(yǎng)箱中孵育1h后換2濃度為5%的37℃培養(yǎng)箱RT-PCR 擴(kuò)增6（H5N1）病毒株中提取的0/A280為1.843和1.882，HA基因，經(jīng)1%瓊脂糖凝2-1）。測序結(jié)果顯示擴(kuò)增

NA 標(biāo)準(zhǔn)分子量 DL5000；泳道 1：pVAX1-HA1；泳道 圖 2-2 pVAX1-HA 表達(dá)質(zhì)粒雙酶切鑒定備-HA5重組質(zhì)粒免疫組、H1N1、H5N1全病毒合后第4天有雜交瘤細(xì)胞生長，未融合的融合率為69.4%。經(jīng)ELISA檢測融合的細(xì)隆4次，克隆陽性率達(dá)100%。最終H1N1全VAX1-HA1重組質(zhì)粒組獲得5株、pVAX1-HA5的中和活性


本文編號：3401198