狂犬病是由狂犬病病毒（rabies virus, RABV）引起的一種古老的人獸共患病，以腦脊髓炎、狂躁不安及進(jìn)行性麻痹為主要特征，該病病死率為100%。近年來(lái)我國(guó)平均每年因狂犬病而死亡的人數(shù)約有2,000人，其中大多數(shù)是由犬、貓或野生動(dòng)物咬傷所致。動(dòng)物狂犬病的及時(shí)正確診斷對(duì)于疑似患者的暴露后治療及指導(dǎo)動(dòng)物狂犬病預(yù)防和控制具有重要意義。目前，用于動(dòng)物狂犬病診斷方法有多種，主要包括病毒直接觀察、病毒分離培養(yǎng)、病毒蛋白檢測(cè)及病毒基因檢測(cè)。病毒直接觀察能夠直接觀察到病毒真實(shí)形態(tài)，但是需要在配備電鏡的專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行觀察；病毒的分離培養(yǎng)可獲得病毒，但是需要考慮生物安全及病毒對(duì)細(xì)胞和動(dòng)物的適應(yīng)性差異；病毒蛋白檢測(cè)是WHO和OIE共同推薦的最廣泛應(yīng)用的金標(biāo)準(zhǔn)診斷方法，但是需要標(biāo)準(zhǔn)化熒光標(biāo)記抗體、熒光顯微鏡與經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的操作人員，整個(gè)過(guò)程繁瑣且檢測(cè)敏感性低。傳統(tǒng)的狂犬病病毒基因檢測(cè)診斷方法包括普通RT-PCR和巢氏RT-PCR，但或敏感性差或耗時(shí)較長(zhǎng)且需接觸致癌染料。熒光定量RT-PCR作為新興的狂犬病病毒基因診斷方法由于其敏感、快速、結(jié)果直觀的特性受到廣泛應(yīng)用。國(guó)內(nèi)外已報(bào)道多種狂犬病病毒熒光定量RT-... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

狂犬病病毒BD06株N基因擴(kuò)增Fig.1-1AmplificationofNgeneofRABVBD06

圖 1-2 測(cè)序結(jié)果的 BLAST 比較Fig. BLAST Comparison of sequencing2.1.3 測(cè)得預(yù)稀釋過(guò)的重組質(zhì)粒 pMD18T-BD06-N 濃度為 3.17 ng / μL，計(jì)算得出10-1、10-2、10-3、10-4、10-5與 10-6稀釋梯度質(zhì)�？截悢�(shù)依次約為 1.3×108、1.3×107、1.3×106、1.3×105、1.3×104與 1.3×103。2.2 特異性試驗(yàn)對(duì) 16 份非狂犬病病毒樣品進(jìn)行熒光定量 RT-PCR，結(jié)果表明：所有樣品 Ct值均小于 NTC Ct 值，且陽(yáng)性對(duì)照最高峰 Tm 高于 80℃時(shí)，陰性對(duì)照、陰性樣品（非狂犬病病毒樣品）及 NTC 的最高峰 Tm 值均低于 80℃。

圖 1-2 測(cè)序結(jié)果的 BLAST 比較Fig. BLAST Comparison of sequencing2.1.3 測(cè)得預(yù)稀釋過(guò)的重組質(zhì)粒 pMD18T-BD06-N 濃度為 3.17 ng / μL，計(jì)算得出10-1、10-2、10-3、10-4、10-5與 10-6稀釋梯度質(zhì)�？截悢�(shù)依次約為 1.3×108、1.3×107、1.3×106、1.3×105、1.3×104與 1.3×103。2.2 特異性試驗(yàn)對(duì) 16 份非狂犬病病毒樣品進(jìn)行熒光定量 RT-PCR，結(jié)果表明：所有樣品 Ct值均小于 NTC Ct 值，且陽(yáng)性對(duì)照最高峰 Tm 高于 80℃時(shí)，陰性對(duì)照、陰性樣品（非狂犬病病毒樣品）及 NTC 的最高峰 Tm 值均低于 80℃。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[5]基因1型狂犬病病毒一步法熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 許運(yùn)斌,邵明富,范金紅,孫彥偉,席進(jìn),涂長(zhǎng)春.  中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2011(04)
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本文編號(hào)：3391940