毛發(fā)是由皮膚演變而來的皮膚附屬物,一般哺乳動物的毛發(fā)要經(jīng)過毛囊的發(fā)育和分化過程,這個過程與很多功能基因、生長因子有關。通過轉(zhuǎn)基因技術,已經(jīng)能夠成功地把外源基因轉(zhuǎn)到哺乳動物細胞內(nèi),促進其毛發(fā)的生長,獲得高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的轉(zhuǎn)基因動物。同時,我們也必須解決轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性。所以,怎樣去除外源基因附屬攜帶的標記元件是解決這個問題的關鍵。本研究應用了Cre-LoxP重組酶系統(tǒng)的特異敲除功能,對構建好pKH-L載體中的HIF-1α基因,進行條件選擇性的刪除,因此轉(zhuǎn)基因技術產(chǎn)物的安全性得到了很大的提高。也為轉(zhuǎn)基因內(nèi)蒙古絨山羊的培育提供了真核表達載體。首先以內(nèi)蒙古白絨山羊胎兒成纖維細胞cDNA為模板,PCR克隆HIF-1α基因,測序正確后,以pKT-L載體為基礎,pMD19T為中間載體,構建pKH-L真核表達載體（功能元件順序K14-HIF-1α-PolyA-LoxP-CDsRed-LoxP）,轉(zhuǎn)染成纖維細胞和皮膚成纖維細胞用脂質(zhì)體介導法,后經(jīng)熒光檢測轉(zhuǎn)染效率均達到65%。測定HIF-1α基因的mRNA在兩種成纖維細胞中的表達程度用熒光定量PCR的方法,結果顯示HIF-1α基因在轉(zhuǎn)染pKH-L的皮膚成纖維細... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRUCT
縮略詞表
引言
    參考文獻
第一章 HIF-1α基因的克隆
    1 材料與方法
    2 結果與分析
    3 討論
第二章 基于Cre/LoxP系統(tǒng)的皮膚特異性表達HIF-1α因真核表達載體的構建
    1 材料與方法
    2 結果與分析
    3 討論
    參考文獻
第三章 真核表達載體pKH-L轉(zhuǎn)染細胞及HIF-1α基因的表達檢測
    1 材料與方法
    2 結果與分析
    3 討論
    參考文獻
第四章 結論
第五章 文獻綜述
    1 低氧誘導因子α
    2 cre-loxp系統(tǒng)
    3 角蛋白K14啟動子
    4 內(nèi)蒙古白絨山羊
    參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間所發(fā)表的學術論文



本文編號：3389204