牛布魯氏菌�。˙rucellosis,簡稱布�。┖团＝Y(jié)核�。˙ovine Tuberculosis）是牛的兩個最重要的人獸共患傳染病,簡稱,“兩病”。牛布病是由布魯氏菌（Brucella）引起的一種人畜共患傳染病,主要引起反芻動物的流產(chǎn)、不育和人類的慢性感染和波狀熱；牛結(jié)核病主要由牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis）引起；除牛結(jié)核外,分枝桿菌也是人結(jié)核的重要病因之一�！皟刹　眹�(yán)重危害了人類健康和養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。目前在我國,�！皟刹　睂嵭写呵飪纱螜z疫,因此準(zhǔn)確、便捷的診斷,對有效控制“兩病”,保障人類及動物健康,顯得極為重要。常規(guī)布病檢測方法主要是檢測血清中布魯氏菌脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）抗體,結(jié)核檢疫方法為結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)實驗。傳統(tǒng)的“兩病”檢測方法費(fèi)時費(fèi)力,并存在非特異性,本研究旨在建立一種特異、靈敏、簡便的牛“兩病”雙重膠體金免疫層析檢測方法,檢測樣本為血清,以便實現(xiàn)�！皟刹　甭�(lián)合檢測,減少采樣次數(shù),簡化檢測程序,消除非特異性,提高檢測效率,同時減少勞動力成本和牛群應(yīng)激反應(yīng)。在布病血清學(xué)檢測方面,傳統(tǒng)的布魯氏菌血清學(xué)檢測方法都是基于... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表(Abbreviation)
1 前言
    1.1 研究問題的由來
    1.2 文獻(xiàn)綜述
        1.2.1 布魯氏菌病的流行情況
        1.2.2 布魯氏菌病的危害
        1.2.3 布魯氏菌結(jié)構(gòu)
        1.2.4 布魯氏菌病的主要診斷方法
        1.2.5 布魯氏菌疫苗研究進(jìn)展
        1.2.6 牛結(jié)核病流行現(xiàn)狀
        1.2.7 牛結(jié)核病主要診斷方法
        1.2.8 SPG分子結(jié)構(gòu)及與IgG的結(jié)合特性
        1.2.9 SPG的應(yīng)用
        1.2.10 膠體金免疫層析原理
        1.2.11 膠體金免疫層析技術(shù)的優(yōu)勢
    1.3 研究目的
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌種及質(zhì)粒
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要藥品
    2.2 方法
        2.2.1 P17、Omp25、bp26基因的引物設(shè)計及PCR擴(kuò)增
        2.2.2 重組質(zhì)粒pET-30a-p17,pET-30a-Omp25,pET-30a-bp26的構(gòu)建
        2.2.3 重組蛋白p17、Omp25、bp26的表達(dá)、鑒定和純化
        2.2.4 Western blot鑒定重組蛋白P17、Omp25、bp26免疫原性
        2.2.5 p17、Omp25、bp26重組蛋白的ELISA活性分析
        2.2.6 重組SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2基因的設(shè)計
        2.2.7 SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2基因的克隆
        2.2.8 SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2基因的原核表達(dá)及鑒定
        2.2.9 膠體金-SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2復(fù)合物的制備
        2.2.10 膠體金試紙條的制備
        2.2.11 膠體金試紙條檢測效果評價
3 結(jié)果與分析
    3.1 重組蛋白P17、OMP25及BP26的表達(dá)及鑒定
        3.1.1 P17、OMP25及BP26扛原表位的預(yù)測結(jié)果
        3.1.2 p17、Omp25、bp26基因的克隆與鑒定
        3.1.3 重組蛋白p17、Omp25、bp26的表達(dá)
        3.1.4 重組蛋白p17、Omp25、bp26反應(yīng)原性分析
    3.2 重組蛋白SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2的表達(dá)及鑒定
        3.2.1 SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.2 重組蛋白SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2的表達(dá)
        3.2.3 Western blot分析SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2
        3.2.4 SPG-(C3)_4(D)_3在牛結(jié)核抗體檢測膠體金試紙條中的初步應(yīng)用
    3.3 牛結(jié)核/布病抗體雙重檢測試紙條
        3.3.1 膠體金試紙條的制備
        3.3.2 膠體金試紙條初步應(yīng)用
4 討論
    4.1 布魯氏菌特異性檢測抗原的選擇
    4.2 重組SPG蛋白IGG結(jié)合區(qū)的多拷貝表達(dá)
    4.3 牛結(jié)核/布病雙重抗體檢測膠體金試紙條檢測效果
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]光滑型布魯桿菌抗體競爭ELISA檢測方法的建立[J]. 王加蘭,胡森,高紅霞,鄭孝輝,步志高.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2009(09)
[2]布魯菌種屬鑒定多重PCR方法的建立及初步應(yīng)用[J]. 丁家波,張存帥,彭小兵,蔣穎,程君生,張爾利,蔣玉文,毛開榮.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2009(05)
[3]中國布魯氏菌病疫情監(jiān)測與控制[J]. 崔步云.  疾病監(jiān)測. 2007(10)
[4]四種牛分枝桿菌特異性蛋白融合表達(dá)及在牛結(jié)核病診斷中的臨床應(yīng)用[J]. 吳波,張書環(huán),鄧銓濤,項杰,陳軍,劉朝,陳鑫,宋念華,陶淑珍,黃繼根,韓永佩,趙波,林祥梅,陳煥春,郭愛珍.  中國奶牛. 2007(10)
[5]牛結(jié)核病抗體膠體金快速檢測技術(shù)的建立和應(yīng)用[J]. 張書環(huán),楊俊興,晁彥杰,顏邦芬,吳波,曹莎,陳穎鈺,譚亞娣,陳煥春,郭愛珍.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2007(07)
[6]布氏桿菌病疫苗的應(yīng)用和研究現(xiàn)狀[J]. 丁家波,毛開榮,程君生,戴志紅,蔣玉文.  微生物學(xué)報. 2006(05)
[7]布魯氏菌病感染與免疫研究近況(續(xù)前)[J]. 尚德秋.  中國地方病防治雜志. 2003(03)
[8]布魯氏菌病免疫制劑現(xiàn)況[J]. 尚德秋.  地方病通報. 2000(01)
[9]鏈球菌蛋白G應(yīng)用于ELISA的實驗研究[J]. 曹之舫,王皓.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 1994(05)
[10]鏈球菌蛋白G——一種優(yōu)于葡萄球菌蛋白A的IgG結(jié)合物[J]. 曹之舫,武建國.  國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊). 1989(05)

碩士論文
[1]家畜布魯氏菌病流行病學(xué)調(diào)查及布魯氏菌單核苷酸多態(tài)性分子分型研究[D]. 莫莎.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]布魯氏菌BLS-L7/L12重組亞單位疫苗的初步研究[D]. 周麗麗.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2007



本文編號：3386843