牛布魯氏菌�。˙rucellosis,簡稱布�。┖团＝Y核�。˙ovine Tuberculosis）是牛的兩個最重要的人獸共患傳染病,簡稱,“兩病”。牛布病是由布魯氏菌（Brucella）引起的一種人畜共患傳染病,主要引起反芻動物的流產、不育和人類的慢性感染和波狀熱；牛結核病主要由牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis）引起；除牛結核外,分枝桿菌也是人結核的重要病因之一�！皟刹　眹乐匚：α巳祟惤】岛宛B(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。目前在我國,�！皟刹　睂嵭写呵飪纱螜z疫,因此準確、便捷的診斷,對有效控制“兩病”,保障人類及動物健康,顯得極為重要。常規(guī)布病檢測方法主要是檢測血清中布魯氏菌脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）抗體,結核檢疫方法為結核菌素皮內變態(tài)反應實驗。傳統(tǒng)的“兩病”檢測方法費時費力,并存在非特異性,本研究旨在建立一種特異、靈敏、簡便的�！皟刹　彪p重膠體金免疫層析檢測方法,檢測樣本為血清,以便實現�！皟刹　甭�(lián)合檢測,減少采樣次數,簡化檢測程序,消除非特異性,提高檢測效率,同時減少勞動力成本和牛群應激反應。在布病血清學檢測方面,傳統(tǒng)的布魯氏菌血清學檢測方法都是基于... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表(Abbreviation)
1 前言
    1.1 研究問題的由來
    1.2 文獻綜述
        1.2.1 布魯氏菌病的流行情況
        1.2.2 布魯氏菌病的危害
        1.2.3 布魯氏菌結構
        1.2.4 布魯氏菌病的主要診斷方法
        1.2.5 布魯氏菌疫苗研究進展
        1.2.6 牛結核病流行現狀
        1.2.7 牛結核病主要診斷方法
        1.2.8 SPG分子結構及與IgG的結合特性
        1.2.9 SPG的應用
        1.2.10 膠體金免疫層析原理
        1.2.11 膠體金免疫層析技術的優(yōu)勢
    1.3 研究目的
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌種及質粒
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要藥品
    2.2 方法
        2.2.1 P17、Omp25、bp26基因的引物設計及PCR擴增
        2.2.2 重組質粒pET-30a-p17,pET-30a-Omp25,pET-30a-bp26的構建
        2.2.3 重組蛋白p17、Omp25、bp26的表達、鑒定和純化
        2.2.4 Western blot鑒定重組蛋白P17、Omp25、bp26免疫原性
        2.2.5 p17、Omp25、bp26重組蛋白的ELISA活性分析
        2.2.6 重組SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2基因的設計
        2.2.7 SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2基因的克隆
        2.2.8 SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2基因的原核表達及鑒定
        2.2.9 膠體金-SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2復合物的制備
        2.2.10 膠體金試紙條的制備
        2.2.11 膠體金試紙條檢測效果評價
3 結果與分析
    3.1 重組蛋白P17、OMP25及BP26的表達及鑒定
        3.1.1 P17、OMP25及BP26扛原表位的預測結果
        3.1.2 p17、Omp25、bp26基因的克隆與鑒定
        3.1.3 重組蛋白p17、Omp25、bp26的表達
        3.1.4 重組蛋白p17、Omp25、bp26反應原性分析
    3.2 重組蛋白SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2的表達及鑒定
        3.2.1 SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2表達載體的構建
        3.2.2 重組蛋白SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2的表達
        3.2.3 Western blot分析SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2
        3.2.4 SPG-(C3)_4(D)_3在牛結核抗體檢測膠體金試紙條中的初步應用
    3.3 牛結核/布病抗體雙重檢測試紙條
        3.3.1 膠體金試紙條的制備
        3.3.2 膠體金試紙條初步應用
4 討論
    4.1 布魯氏菌特異性檢測抗原的選擇
    4.2 重組SPG蛋白IGG結合區(qū)的多拷貝表達
    4.3 牛結核/布病雙重抗體檢測膠體金試紙條檢測效果
5 結論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]光滑型布魯桿菌抗體競爭ELISA檢測方法的建立[J]. 王加蘭,胡森,高紅霞,鄭孝輝,步志高.  中國獸醫(yī)科學. 2009(09)
[2]布魯菌種屬鑒定多重PCR方法的建立及初步應用[J]. 丁家波,張存帥,彭小兵,蔣穎,程君生,張爾利,蔣玉文,毛開榮.  中國獸醫(yī)學報. 2009(05)
[3]中國布魯氏菌病疫情監(jiān)測與控制[J]. 崔步云.  疾病監(jiān)測. 2007(10)
[4]四種牛分枝桿菌特異性蛋白融合表達及在牛結核病診斷中的臨床應用[J]. 吳波,張書環(huán),鄧銓濤,項杰,陳軍,劉朝,陳鑫,宋念華,陶淑珍,黃繼根,韓永佩,趙波,林祥梅,陳煥春,郭愛珍.  中國奶牛. 2007(10)
[5]牛結核病抗體膠體金快速檢測技術的建立和應用[J]. 張書環(huán),楊俊興,晁彥杰,顏邦芬,吳波,曹莎,陳穎鈺,譚亞娣,陳煥春,郭愛珍.  動物醫(yī)學進展. 2007(07)
[6]布氏桿菌病疫苗的應用和研究現狀[J]. 丁家波,毛開榮,程君生,戴志紅,蔣玉文.  微生物學報. 2006(05)
[7]布魯氏菌病感染與免疫研究近況(續(xù)前)[J]. 尚德秋.  中國地方病防治雜志. 2003(03)
[8]布魯氏菌病免疫制劑現況[J]. 尚德秋.  地方病通報. 2000(01)
[9]鏈球菌蛋白G應用于ELISA的實驗研究[J]. 曹之舫,王皓.  中華微生物學和免疫學雜志. 1994(05)
[10]鏈球菌蛋白G——一種優(yōu)于葡萄球菌蛋白A的IgG結合物[J]. 曹之舫,武建國.  國外醫(yī)學(微生物學分冊). 1989(05)

碩士論文
[1]家畜布魯氏菌病流行病學調查及布魯氏菌單核苷酸多態(tài)性分子分型研究[D]. 莫莎.南京農業(yè)大學 2011
[2]布魯氏菌BLS-L7/L12重組亞單位疫苗的初步研究[D]. 周麗麗.中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院 2007



本文編號：3386843