牛布魯氏菌病（Brucellosis,簡(jiǎn)稱布�。┖团＝Y(jié)核�。˙ovine Tuberculosis）是牛的兩個(gè)最重要的人獸共患傳染病,簡(jiǎn)稱,“兩病”。牛布病是由布魯氏菌（Brucella）引起的一種人畜共患傳染病,主要引起反芻動(dòng)物的流產(chǎn)、不育和人類的慢性感染和波狀熱；牛結(jié)核病主要由牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis）引起；除牛結(jié)核外,分枝桿菌也是人結(jié)核的重要病因之一�！皟刹　眹�(yán)重危害了人類健康和養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。目前在我國(guó),�！皟刹　睂�(shí)行春秋兩次檢疫,因此準(zhǔn)確、便捷的診斷,對(duì)有效控制“兩病”,保障人類及動(dòng)物健康,顯得極為重要。常規(guī)布病檢測(cè)方法主要是檢測(cè)血清中布魯氏菌脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）抗體,結(jié)核檢疫方法為結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。傳統(tǒng)的“兩病”檢測(cè)方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力,并存在非特異性,本研究旨在建立一種特異、靈敏、簡(jiǎn)便的�！皟刹　彪p重膠體金免疫層析檢測(cè)方法,檢測(cè)樣本為血清,以便實(shí)現(xiàn)牛“兩病”聯(lián)合檢測(cè),減少采樣次數(shù),簡(jiǎn)化檢測(cè)程序,消除非特異性,提高檢測(cè)效率,同時(shí)減少勞動(dòng)力成本和牛群應(yīng)激反應(yīng)。在布病血清學(xué)檢測(cè)方面,傳統(tǒng)的布魯氏菌血清學(xué)檢測(cè)方法都是基于... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表(Abbreviation)
1 前言
    1.1 研究問題的由來
    1.2 文獻(xiàn)綜述
        1.2.1 布魯氏菌病的流行情況
        1.2.2 布魯氏菌病的危害
        1.2.3 布魯氏菌結(jié)構(gòu)
        1.2.4 布魯氏菌病的主要診斷方法
        1.2.5 布魯氏菌疫苗研究進(jìn)展
        1.2.6 牛結(jié)核病流行現(xiàn)狀
        1.2.7 牛結(jié)核病主要診斷方法
        1.2.8 SPG分子結(jié)構(gòu)及與IgG的結(jié)合特性
        1.2.9 SPG的應(yīng)用
        1.2.10 膠體金免疫層析原理
        1.2.11 膠體金免疫層析技術(shù)的優(yōu)勢(shì)
    1.3 研究目的
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌種及質(zhì)粒
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要藥品
    2.2 方法
        2.2.1 P17、Omp25、bp26基因的引物設(shè)計(jì)及PCR擴(kuò)增
        2.2.2 重組質(zhì)粒pET-30a-p17,pET-30a-Omp25,pET-30a-bp26的構(gòu)建
        2.2.3 重組蛋白p17、Omp25、bp26的表達(dá)、鑒定和純化
        2.2.4 Western blot鑒定重組蛋白P17、Omp25、bp26免疫原性
        2.2.5 p17、Omp25、bp26重組蛋白的ELISA活性分析
        2.2.6 重組SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2基因的設(shè)計(jì)
        2.2.7 SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2基因的克隆
        2.2.8 SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2基因的原核表達(dá)及鑒定
        2.2.9 膠體金-SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2復(fù)合物的制備
        2.2.10 膠體金試紙條的制備
        2.2.11 膠體金試紙條檢測(cè)效果評(píng)價(jià)
3 結(jié)果與分析
    3.1 重組蛋白P17、OMP25及BP26的表達(dá)及鑒定
        3.1.1 P17、OMP25及BP26扛原表位的預(yù)測(cè)結(jié)果
        3.1.2 p17、Omp25、bp26基因的克隆與鑒定
        3.1.3 重組蛋白p17、Omp25、bp26的表達(dá)
        3.1.4 重組蛋白p17、Omp25、bp26反應(yīng)原性分析
    3.2 重組蛋白SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2的表達(dá)及鑒定
        3.2.1 SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.2 重組蛋白SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2的表達(dá)
        3.2.3 Western blot分析SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2
        3.2.4 SPG-(C3)_4(D)_3在牛結(jié)核抗體檢測(cè)膠體金試紙條中的初步應(yīng)用
    3.3 牛結(jié)核/布病抗體雙重檢測(cè)試紙條
        3.3.1 膠體金試紙條的制備
        3.3.2 膠體金試紙條初步應(yīng)用
4 討論
    4.1 布魯氏菌特異性檢測(cè)抗原的選擇
    4.2 重組SPG蛋白IGG結(jié)合區(qū)的多拷貝表達(dá)
    4.3 牛結(jié)核/布病雙重抗體檢測(cè)膠體金試紙條檢測(cè)效果
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]布魯氏菌BLS-L7/L12重組亞單位疫苗的初步研究[D]. 周麗麗.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2007



本文編號(hào)：3386843