本研究利用干酪乳桿菌表達(dá)傳染性法氏囊病毒VP2蛋白，通過口服方式免疫雞，誘導(dǎo)機(jī)體局部黏膜免疫和全身系統(tǒng)免疫應(yīng)答。首先通過RT-PCR擴(kuò)增VP2基因片段，將目的片段構(gòu)建在pLA穿梭質(zhì)粒上，經(jīng)過PCR驗(yàn)證，正確的命名為pLA-VP2。pLA-VP2重組質(zhì)粒在大腸桿菌中經(jīng)克隆增殖后，提取質(zhì)粒，然后電轉(zhuǎn)化到干酪乳桿菌中，再經(jīng)過提取質(zhì)粒，PCR驗(yàn)證，正確的命名為pLA-VP2/L. casei。應(yīng)用SDS-PAGE檢測(cè)重組菌表達(dá)目的蛋白VP2，得到約90KDa的融合蛋白，與預(yù)期結(jié)果相符。Western blot結(jié)果顯示VP2蛋白可以與抗IBDV多抗血清發(fā)生特異性反應(yīng)，具有很好反應(yīng)原性。流式細(xì)胞儀的散射光檢測(cè)器可以捕捉到pLA-VP2重組菌菌體表面的熒光，且pLA-VP2/L. casei熒光強(qiáng)度強(qiáng)于pLA/L. casei對(duì)照組，應(yīng)用正態(tài)分布函數(shù)計(jì)算pgsA-VP2融合蛋白的表達(dá)效率，約為80%。結(jié)果表明，IBDV VP2蛋白已成功展示在干酪乳桿菌表面。以構(gòu)建的pLA-VP2/L. casei免疫雛雞，誘導(dǎo)機(jī)體局部黏膜免疫和全身系統(tǒng)免疫應(yīng)答，并通過攻毒檢測(cè)重組干酪乳桿菌免疫保護(hù)效力。為了確定免疫... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
符號(hào)說明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 雞傳染性法氏囊病概述
        1.1.1 病原學(xué)特征
        1.1.2 分子生物學(xué)特征
    1.2 雞傳染性法氏囊病毒基因組結(jié)構(gòu)
        1.2.1 VP1 蛋白
        1.2.2 VP2 蛋白
        1.2.3 VP3 蛋白
        1.2.4 VP4 蛋白
        1.2.5 VP5 蛋白
    1.3 傳染性法氏囊病毒疫苗研究進(jìn)展
    1.4 乳酸菌作為外源基因表達(dá)載體的研究進(jìn)展
        1.4.1 益生菌
        1.4.2 乳酸菌作為外源基因表達(dá)載體的可行性
        1.4.3 乳酸菌作為口服疫苗載體對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的影響
        1.4.4 乳酸菌作為外源基因遞送載體的研究
    1.5 本研究的目的和意義
第二章 重組干酪乳桿菌表達(dá) IBDV B87 株 VP2 蛋白系統(tǒng)的構(gòu)建
    2.1 材料
        2.1.1 質(zhì)粒、菌株
        2.1.2 酶及試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
        2.2.2 目的基因片段的獲取
        2.2.3 目的片段測(cè)序鑒定
        2.2.4 pLA-VP2 重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.5 重組干酪乳桿菌的構(gòu)建
        2.2.6 重組干酪乳桿菌的鑒定
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 IBDV B87 株 VP2 基因擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.2 重組質(zhì)粒 pMD-VP2 的酶切鑒定結(jié)果
        2.3.3 重組質(zhì)粒 pMD-VP2 的 PCR 鑒定結(jié)果
        2.3.4 重組質(zhì)粒 pMD-VP2 的測(cè)序鑒定結(jié)果
        2.3.5 pLA-VP2 重組質(zhì)粒 PCR 鑒定結(jié)果
        2.3.6 重組蛋白的 Western blot 檢測(cè)結(jié)果
        2.3.7 重組干酪乳桿菌流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果
    2.4 討論
第三章 pLA-VP2 重組干酪乳桿菌本體動(dòng)物免疫原性的研究
    3.1 材料
        3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 菌株
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 IBDV 超強(qiáng)毒半數(shù)感染量（ID50)測(cè)定
        3.2.2 免疫劑量及免疫次數(shù)的探究
        3.2.3 免疫途徑的探究
        3.2.4 免疫用重組干酪乳桿菌菌懸液的制備
        3.2.5 樣本采集
        3.2.6 間接 ELISA
        3.2.7 脾臟 T 淋巴細(xì)胞的增殖試驗(yàn)
        3.2.8 病理切片的制作
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 半數(shù)感染量(ID50)的測(cè)定
        3.3.2 pLA-VP2 重組干酪乳桿菌免疫方法的探究
    3.4 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
個(gè)人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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