鴨甲肝病毒A型（Duck Hepatitis A Virus, DHAV-1）屬于小RNA病毒科,禽肝炎病毒屬。DHAV-1主要引起10d以?xún)?nèi)的雛鴨出現(xiàn)以肝損傷為特征的鴨病毒性肝炎病,該病傳播迅速、致死性高,雛鴨一旦感染該病,死亡率高達(dá)90%以上,這給我國(guó)的養(yǎng)鴨業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本試驗(yàn)以DHAV-1分別感染原代鴨胚成纖維細(xì)胞（DEF）、4d雛鴨和21d中鴨,于DEF感染DHAV-1后的0h對(duì)照組和6h、12h、24h、48h、72h、96h試驗(yàn)組收取DEF,檢測(cè)DEF中病毒含量和細(xì)胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA表達(dá)水平。DHAV-1感染DEF后,在24h致細(xì)胞病變,經(jīng)RT-qPCR檢測(cè)病毒RNA增殖情況,DHAV-1在感染DEF后的6h-48h上升,48h到達(dá)高峰,而后下降。并于24h在透射電鏡下觀(guān)察到直徑在30rnm左右的球形病毒顆粒。上述結(jié)果表明,本試驗(yàn)成功建立DHAV-1細(xì)胞感染模型。DEF感染DHAV-1后,細(xì)胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ在6h-72h上調(diào),96h下調(diào),并存在顯著差異。于DHAV-1感染后0h對(duì)照組與6h,12h、24h... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
    1 鴨甲肝病毒A型(DHAV-1)概述
        1.1 DHAV-1簡(jiǎn)介
        1.2 DHAV-1致病機(jī)制的研究現(xiàn)狀
        1.3 DHAV-1細(xì)胞培養(yǎng)現(xiàn)狀
    2 白細(xì)胞介素-2(IL-2)概述
    3 白細(xì)胞介素-12-B(IL-12-B)概述
    4 干擾素-γ(IFN-γ)概述
    5 細(xì)胞因子的關(guān)系與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
    6 本研究的目的與意義
材料和方法
    1 試驗(yàn)儀器及材料
        1.1 主要儀器設(shè)備
        1.2 主要試劑
        1.3 供試毒株
        1.4 試驗(yàn)動(dòng)物
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 原代鴨胚成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        2.2 DHAV-1鄭株細(xì)胞半數(shù)感染量(TICD_(50))測(cè)定
        2.3 細(xì)胞病變的形態(tài)學(xué)觀(guān)察
            2.3.1 倒置顯微鏡觀(guān)察
            2.3.2 光鏡觀(guān)察
            2.3.3 透射電鏡觀(guān)察
        2.4 試驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)和處理
        2.5 DHAV-1鄭株鴨胚半數(shù)致死量(ELD_(50))測(cè)定
        2.6 試驗(yàn)動(dòng)物攻毒與取材
        2.7 細(xì)胞與組織總RNA的提取
        2.8 總RNA的反轉(zhuǎn)錄
        2.9 PCR方法檢測(cè)
        2.10 RT-qPCR測(cè)定DEF與鴨組織中病毒含量
        2.11 RT-qPCR檢測(cè)細(xì)胞與組織中細(xì)胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA表達(dá)水平
            2.11.1 引物設(shè)計(jì)
            2.11.2 反應(yīng)體系的配置
            2.11.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理
結(jié)果與分析
    1 DEF試驗(yàn)部分
        1.1 DHAV-1鄭株細(xì)胞半數(shù)感染量(TICD_(50))測(cè)定
        1.2 細(xì)胞病變形態(tài)學(xué)觀(guān)察
            1.2.1 倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)
            1.2.2 光鏡下觀(guān)察細(xì)胞病變
            1.2.3 超微細(xì)胞病理學(xué)變化
        1.3 RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)病毒核酸RNA結(jié)果
        1.4 RT-qPCR測(cè)定細(xì)胞內(nèi)病毒含量
        1.5 細(xì)胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA在細(xì)胞中的表達(dá)水平變化
    2 動(dòng)物試驗(yàn)部分
        2.1 DHAV-1鄭株鴨胚半數(shù)致死量(ELD_(50))測(cè)定
        2.2 4d雛鴨與21d中鴨接種DHAV-1后解剖學(xué)觀(guān)察
        2.3 RT-PCR檢測(cè)4d雛鴨和21d中鴨肝臟的病毒核酸RNA結(jié)果
        2.4 RT-qPCR檢測(cè)4d雛鴨與21d中鴨肝、脾、胸腺、法氏囊中DHAV-1病毒含量變化
        2.5 細(xì)胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA在細(xì)胞中的表達(dá)水平變化
            2.5.1 細(xì)胞因子IL-2基因mRNA在4d雛鴨和21d中鴨肝、脾、胸腺、法氏囊中的表達(dá)水平變化
            2.5.2 細(xì)胞因子IL-12-B基因mRNA在4d雛鴨和21d中鴨肝、脾、胸腺、法氏囊中的表達(dá)水平變化
            2.5.3 細(xì)胞因子IFN-γ基因mRNA在4d雛鴨和21d中鴨肝、脾、胸腺、法氏囊中的表達(dá)水平變化
討論
    1 DHAV-1形態(tài)特點(diǎn)及質(zhì)細(xì)胞病變特點(diǎn)
    2 DHAV-1在原代DEF中的增殖特點(diǎn)
    3 DVAH-1感染原代DEF后細(xì)胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA的表達(dá)水平分析
    4 DHAV-1在鴨體內(nèi)的增殖特點(diǎn)
        4.1 DHAV-1在4d雛鴨與21d中鴨肝臟中的增殖特點(diǎn)
        4.2 DHAV-1在4d雛鴨與21d中鴨脾臟中的增殖特點(diǎn)
        4.3 DHAV-1在4d雛鴨與21d中鴨胸腺中的增殖特點(diǎn)
        4.4 DHAV-1在4d雛鴨與21d中鴨法氏囊中的增殖特點(diǎn)
    5 鴨感染DHAV-1后細(xì)胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA的表達(dá)水平分析
        5.1 4d雛鴨與21d中鴨感染DHAV-1后細(xì)胞因子IL-2的表達(dá)水平
        5.2 4d雛鴨與21d中鴨感染DHAV-1后細(xì)胞因子IL-12-B的表達(dá)水平
        5.3 4d雛鴨與21d中鴨感染DHAV-1后細(xì)胞因子IFN-γ的表達(dá)水平
    6 DEF與鴨體內(nèi)病毒含量與細(xì)胞因子表達(dá)水平的異同
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3385078