圍產(chǎn)期是奶牛生產(chǎn)繁殖中的重要時(shí)期,通常是指分娩前3周至分娩后3周的這一階段,能量負(fù)平衡、分娩、泌乳等導(dǎo)致該階段奶牛容易發(fā)生各種疾病。硒作為人和動(dòng)物必需的一種微量元素,通過硒蛋白的形式發(fā)揮抗氧化和抗炎功能,在奶牛健康維護(hù)中發(fā)揮重要作用。本試驗(yàn)篩選24頭體況相近的奶牛,隨機(jī)分為兩組（C組和T組）,C組飼喂基礎(chǔ)日糧,T組在預(yù)產(chǎn)期前21天開始在每千克干物質(zhì)（dry matter,DM）日糧中添加硒0.3mg直至分娩當(dāng)天。在奶牛分娩后6小時(shí)內(nèi),收集尾靜脈血漿,提取蛋白并富集低豐度蛋白,酶解后對肽段進(jìn)行iTRAQ標(biāo)記,然后利用LC-MS/MS進(jìn)行質(zhì)譜分析,最后獲取兩組間的差異豐度蛋白并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。為驗(yàn)證蛋白組學(xué)數(shù)據(jù)可靠性,用ELISA方法對其中3個(gè)差異豐度蛋白進(jìn)行定量分析。本研究的結(jié)果如下:研究一:本試驗(yàn)采用iTRAQ定量蛋白組學(xué)技術(shù)在分娩奶牛血漿中鑒定出蛋白質(zhì)542個(gè),這些蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)為5-12,相對分子質(zhì)量集中在10-60kD。按蛋白質(zhì)T/C值大于1.2或者小于0.83且P<0.05的標(biāo)準(zhǔn)篩選差異表達(dá)蛋白質(zhì),結(jié)果顯示差異豐度蛋白質(zhì)有48種,包括14種上調(diào)蛋白和34種下調(diào)蛋白,其... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

iTRAQ技術(shù)常規(guī)步驟Fig.1iTRAQroutinesteps

圖 2-1 血漿低豐度蛋白富集后 SDS-PAGE 圖Fig 2-1. The SDS-PAGE result of enriching plasma low abundance pr測情況用具有高質(zhì)量精度、高分辨率的 Q Exactive 質(zhì)譜儀，在數(shù)據(jù)好的質(zhì)量偏差，并最終獲得高質(zhì)量的 MS1 和 MS2 圖譜。如段的質(zhì)量偏差主要分布在 10ppm 以內(nèi)，說明鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可T 分析工具對 MS 圖譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，獲得每張 MS2 圖譜的得 的 MASCOT 得分較為理想，約 77.79%以上的肽段得分在位數(shù)為 27.75 分。每一套 iTRAQ 數(shù)據(jù)在定性分析工作中均使準(zhǔn)，結(jié)合所得的優(yōu)秀肽段得分分布情況，進(jìn)一步說明 MS 實(shí)驗(yàn)定量方面的質(zhì)控，如圖 2-4 所示，等量標(biāo)記的兩組樣品中大部近 1，Basepeak 圖是在串聯(lián)質(zhì)譜過程中將每個(gè)時(shí)間點(diǎn)質(zhì)譜檢

圖 2-2 肽段離子質(zhì)量偏差分布坐標(biāo)為肽段離子理論質(zhì)荷比和質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)測得質(zhì)荷比的質(zhì)量偏差，縱坐標(biāo)為 MASCO得分。Fig.2-2 Mass error distribution (ppm)ote: The abscissa is the mass deviation of the peptide mass theoretical mass-to-charge rass-to-charge ratio measured by the mass spectrometry experiment; the ordinate is the MApeptide score.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)及其在中藥作用機(jī)制研究中的應(yīng)用[J]. 辛萍,匡海學(xué),李曉亮,王宇,張本梅,布赫,王知斌,孟永海,王艷宏,王秋紅.  中國中藥雜志. 2018(05)
[2]iTRAQ技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域的研究進(jìn)展[J]. 王國佐,龔盛強(qiáng),楊梅,蘭斌,葛金文.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2017(33)
[3]動(dòng)物科學(xué)中的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)應(yīng)用[J]. 王欣,唐婕.  畜牧與飼料科學(xué). 2017(11)
[4]鈣結(jié)合蛋白S100A13與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 王奕平,周家華.  東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2017(04)
[5]奶牛脂肪肝產(chǎn)生的原因、危害、臨床癥狀及其防治[J]. 王彥濤.  現(xiàn)代畜牧科技. 2017(07)
[6]不同泌乳階段奶牛血清礦物元素含量的變化[J]. 秦敏,張輝,史彬林,郭曉宇,閆素梅.  飼料工業(yè). 2017(11)
[7]APT5A1在大腸癌中的表達(dá)及意義[J]. 謝春英,徐雪松,楊照微,何成彥,黃麗紅,王海,周勁松.  中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué). 2016(12)
[8]圍產(chǎn)后期奶牛的血液生化指標(biāo)特征[J]. 徐闖,于洪江,沈泰鈺,張子揚(yáng),高三思,朱奎玲,黃寶銀,楊威,鞏和秋,于延海.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2016(08)
[9]圍產(chǎn)期奶牛的生理變化[J]. 胡熙民.  現(xiàn)代畜牧科技. 2016(03)
[10]圍產(chǎn)期奶牛的生理特點(diǎn)及營養(yǎng)代謝特征研究進(jìn)展[J]. 杜兵耀,馬晨,楊開倫,余雄.  乳業(yè)科學(xué)與技術(shù). 2016(01)

碩士論文
[1]甘氨酸對奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖、凋亡及免疫因子基因表達(dá)影響的研究[D]. 湯明惠.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[2]奶牛圍產(chǎn)期血清氧化應(yīng)激與微量元素含量變化的研究[D]. 張家銘.揚(yáng)州大學(xué) 2014
[3]黃岡市圍產(chǎn)期奶牛添加鋅錳硒和二氫吡啶的研究[D]. 隋晨.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[4]圍產(chǎn)期奶牛血清蛋白質(zhì)組學(xué)的初步研究[D]. 李珊珊.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011
[5]有機(jī)硒對奶牛產(chǎn)奶性能、營養(yǎng)物質(zhì)消化及血液生化指標(biāo)的影響[D]. 王登峰.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



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