因?yàn)樵谶z傳以及理化因素等方面與人存在很大的相似性,豬,這一主要家畜,常常作為模型被用于一些疾病的研究,比如說糖尿病和肥胖,脂代謝紊亂等。近年來,游離脂肪酸的生理功能受到廣泛關(guān)注,因?yàn)槠洳粌H可以為組織提供能量而且還可以作為信號(hào)分子介導(dǎo)各種細(xì)胞進(jìn)程。有研究發(fā)現(xiàn),糖尿病、肥胖、脂代謝紊亂與外周游離脂肪酸水平的升高存在著緊密的聯(lián)系。03FAR1是新發(fā)現(xiàn)的的長(zhǎng)鏈脂肪酸受體,體內(nèi)的脂質(zhì)生成、細(xì)胞增殖、激素分泌等代謝過程都存在著03FAR1的參與。03FAR1被認(rèn)為與某些疾病有關(guān),可以把它當(dāng)作一些疾病的藥物靶點(diǎn),比如說肥胖癥,糖尿病等。在基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制中,基因的轉(zhuǎn)錄是一個(gè)非常主要的過程,它在遺傳信息傳遞中起到著紐帶的作用。而轉(zhuǎn)錄的頻率和轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)受到啟動(dòng)子這一關(guān)鍵的元件調(diào)控。啟動(dòng)子主要通過與轉(zhuǎn)錄因子相互作用,來調(diào)控基因的表達(dá)。啟動(dòng)子的識(shí)別,對(duì)于闡述基因的功能來說有著非常重要的作用。為了進(jìn)一步了解豬03FAR1基因的功能和轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,我們克隆出豬03FAR1基因的啟動(dòng)子區(qū)域,并對(duì)其核心區(qū)域進(jìn)行研究,研究結(jié)果如下：（1）利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)了豬的O3FAR1基因在各個(gè)組織的表達(dá)情況,并繪制了... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮寫對(duì)照表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 前言
    2 真核生物啟動(dòng)子研究概述
        2.1 真核啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)
        2.2 轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子
        2.3 啟動(dòng)子的研究熱點(diǎn)
    3 游離脂肪酸的研究進(jìn)展
        3.1 游離脂肪酸
        3.2 游離脂肪酸受體
    4 O3FAR1基因的研究概述
    5 本試驗(yàn)研究的目的與意義
第二章 材料與方法
    1 試驗(yàn)材料與試劑
        1.1 主要的生化試劑和藥品
        1.2 細(xì)胞、菌株和載體及豬基因組DNA
        1.3 試劑盒
        1.4 主要的儀器及設(shè)備
        1.5 緩沖液和常用試劑的配制
        1.6 主要的生物學(xué)軟件和網(wǎng)站
        1.7 所用載體
    2 試驗(yàn)方法與步驟
        2.1 豬不同組織總RNA的提取及cDNA的合成
        2.2 豬O3FAR1基因組織表達(dá)譜分析
        2.3 豬O3FAR1基因5'端上游調(diào)控區(qū)域的克隆和分析
            2.3.1 克隆基因5'端上游調(diào)控區(qū)域
            2.3.2 豬O3FAR1基因5'端上游調(diào)控區(qū)域的生物信息學(xué)分析
        2.4 豬O3FAR1基因5'端上游調(diào)控區(qū)域的缺失分析
            2.4.1 基因5端上游調(diào)控區(qū)域缺失載體的構(gòu)建
            2.4.2 啟動(dòng)子在三種不同真核細(xì)胞中的活性分析
        2.5 豬O3FAR1基因核心啟動(dòng)子區(qū)的尋找及轉(zhuǎn)錄因子分析
        2.6 定點(diǎn)突變的驗(yàn)證試驗(yàn)
            2.6.1 構(gòu)建野生型和突變型的熒光報(bào)告載體質(zhì)粒
            2.6.2 野生型和突變型的熒光報(bào)告載體質(zhì)粒的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
            2.6.3 構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子C/EBPβ
            2.6.4 野生型熒光報(bào)告載體質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子的共轉(zhuǎn)染
        2.7 轉(zhuǎn)錄因子的超表達(dá)與RNA干擾
            2.7.1 超表達(dá)與RNA干擾定量引物的設(shè)計(jì)
            2.7.2 轉(zhuǎn)錄因子的超表達(dá)
            2.7.3 轉(zhuǎn)錄因子的RNA干擾試驗(yàn)
        2.8 EMSA驗(yàn)證試驗(yàn)
            2.8.1 EMSA探針的設(shè)計(jì)
            2.8.2 核蛋白的抽提
            2.8.3 結(jié)合反應(yīng)
            2.8.4 聚丙烯酰胺凝膠電泳
            2.8.5 電轉(zhuǎn)移
            2.8.6 交聯(lián)固定與化學(xué)發(fā)光反應(yīng)
            2.8.7 化學(xué)發(fā)光圖像顯示
        2.9 豬O3FAR1基因的超表達(dá)試驗(yàn)
            2.9.1 豬O3FAR1基因CDS區(qū)的獲取
            2.9.2 pcDNA3.1-CDS真核表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.9.3 pcDNA3.1-CDS真核表達(dá)載體的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
            2.9.4 細(xì)胞RNA的提取與cDNA第一鏈的合成
            2.9.5 熒光定量PCR檢測(cè)
第三章 結(jié)果分析
    1 豬O3FAR1基因啟動(dòng)子克隆與功能分析
        1.1 豬O3FAR1基因的組織表達(dá)譜分析
        1.2 豬O3FAR1基因啟動(dòng)子上游調(diào)控區(qū)域的克隆及分析
            1.2.1 豬O3FAR1基因5'上游調(diào)控序列的獲取
            1.2.2 豬O3FAR1基因啟動(dòng)子的生物信息學(xué)分析
            1.2.3 豬O3FAR1基因5'上游調(diào)控序列的克隆
        1.3 豬O3FAR1啟動(dòng)子缺失載體的構(gòu)建
            1.3.1 擴(kuò)增缺失片段
            1.3.2 構(gòu)建雙熒光素酶報(bào)告基因載體
        1.4 豬O3FAR1啟動(dòng)子活性的檢測(cè)
        1.5 點(diǎn)突變?cè)囼?yàn)驗(yàn)證
        1.6 轉(zhuǎn)錄因子的超表達(dá)試驗(yàn)
        1.7 轉(zhuǎn)錄因子的RNA干擾試驗(yàn)
        1.8 EMSA試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果
    2 豬O3FAR1基因的超表達(dá)試驗(yàn)
        2.1 不同物種O3FAR1基因的生物信息學(xué)比對(duì)
        2.2 豬O3FAR1基因超表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3 超表達(dá)載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞后RNA的獲取
        2.4 熒光定量PCR檢測(cè)豬O3FAR1基因超表達(dá)結(jié)果
第四章 討論
    1 豬O3FAR1基因的生物信息學(xué)與表達(dá)譜分析
        1.1 豬O3FAR1基因的生物信息學(xué)分析
        1.2 豬O3FAR1基因的表達(dá)譜分析
    2 啟動(dòng)子的活性分析
    3 轉(zhuǎn)錄因子CEBPβ與豬O3FAR1基因關(guān)系的討論
        3.1 超表達(dá)結(jié)果
        3.2 RNA干擾結(jié)果
        3.3 轉(zhuǎn)錄因子CEBPβ與脂肪組織發(fā)育的關(guān)系
    4 本試驗(yàn)中一些試驗(yàn)技術(shù)的討論
        4.1 關(guān)于siRNA干擾技術(shù)
        4.2 關(guān)于EMSA試驗(yàn)技術(shù)
第五章 小結(jié)
    1 本研究的主要成果
    2 本研究的不足之處及下一步計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PPARγ2啟動(dòng)子的克隆及甲基化與基因表達(dá)的相關(guān)性分析[J]. 曹雁行,張敏,馮鑫磊,李星星,潘慶杰.  生物技術(shù). 2013(04)
[2]GPR120的研究進(jìn)展[J]. 盧伊娜,胡慧,朱維良,王賀瑤.  生命科學(xué). 2008(02)
[3]豬抗病育種候選基因研究進(jìn)展[J]. 袁樹楷,王金勇,謝和芳,李琴,白小青.  中國畜牧雜志. 2007(15)
[4]瘦肉豬育種的發(fā)展及展望[J]. 熊遠(yuǎn)著.  中國工程科學(xué). 2000(09)



本文編號(hào)：3380667