弓形蟲�。═oxoplasmosis）是一種由剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）引起的世界性分布人畜共患寄生蟲病,人和動物的感染率都很高,嚴重危害人類健康,對孕婦和免疫缺陷、免疫抑制患者的損害尤甚,并給世界各國的畜牧業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。國內(nèi)散養(yǎng)雞群中的弓形蟲病感染不容忽視,平均在30%左右。人類通過接觸病雞或食用未煮熟的雞可感染弓形蟲,因此加強對雞弓形蟲感染的檢測,對防控弓形蟲病及人類健康有著重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。目前,對畜禽弓形蟲感染的檢測手段主要有病原學(xué)診斷、免疫學(xué)診斷和核酸檢測技術(shù)三類。ELISA法具有靈敏性高、特異性高、重復(fù)性好等特點,且對檢測設(shè)備要求不高,是一種優(yōu)良的檢測手段。市場上銷售的檢測雞弓形蟲抗體的ELISA試劑盒特異性差、抗體檢出時間短,對感染后期的抗體無法檢出。近些年在國內(nèi)外,關(guān)于豬、牛、羊等家畜動物弓形蟲感染及抗體檢測技術(shù)的研究和報道較多,但對雞等禽類弓形蟲感染檢測的研究較少。本實驗室對GRA8全基因進行了克隆表達,并進行了Western blot和ELISA驗證,表明GRA8是一種具有很好診斷價值的雞弓形蟲病診斷抗原,但由于GRA8基因被正確插... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一篇 文獻綜述
    第一章 弓形蟲與弓形蟲病
        1 弓形蟲簡介
            1.1 病原學(xué)
            1.2 生活史
            1.3 弓形蟲對環(huán)境的抵抗力
        2 弓形蟲病的流行病學(xué)概況
            2.1 豬的弓形蟲病
            2.2 羊的弓形蟲病
            2.3 人的弓形蟲病
            2.4 犬貓的弓形蟲病
            2.5 雞的弓形蟲病
        3 弓形蟲病的防治
            3.1 弓形蟲病的預(yù)防
            3.2 弓形蟲病的治療
        參考文獻
    第二章 弓形蟲病的實驗診斷
        1 病原學(xué)診斷
            1.1 組織學(xué)診斷
            1.2 動物接種或組織培養(yǎng)
        2 分子學(xué)診斷
            2.1 核酸分子雜交技術(shù)
            2.2 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)
            2.3 基因芯片技術(shù)
        3 免疫學(xué)診斷
            3.1 間接紅細胞血凝試驗(IHA)
            3.2 酶免疫技術(shù)(EIA)
        4 ELISA抗體檢測試劑盒存在的問題
        參考文獻
第二篇 試驗研究
    第三章 雞弓形蟲致密顆粒蛋白GRA8的截短表達
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 實驗方法
        2 實驗結(jié)果
            2.1 蛋白質(zhì)信號肽預(yù)測
            2.2 蛋白質(zhì)跨膜區(qū)、親疏水性、抗原性預(yù)測
            2.3 截短基因的PCR擴增
            2.4 pMD19T-sGRA8的構(gòu)建
            2.5 pCold TF-sGRA8的構(gòu)建
            2.6 截短型重組蛋白的誘導(dǎo)表達
            2.7 截短型重組蛋白在E.coli BL21中的分布
            2.8 截短重組蛋白的純化
            2.9 截短型重組蛋白的Western blot結(jié)果
        3 討論
        參考文獻
    第四章 sGRA8-ELISA檢測方法的建立
        1 實驗材料
            1.1 實驗動物
            1.2 蟲株及其他重要血清
            1.3 菌種
            1.4 主要儀器
            1.5 主要試劑及耗材
        2 實驗方法
            2.1 蟲株的復(fù)蘇、擴增與純化
            2.2 雞弓形蟲人工感染血清的采集
            2.3 sGRA8-ELISA方法的建立
            2.4 sGRA8-ELISA法的操作步驟
            2.5 ELISA陰、陽性判定標準的確定
            2.6 特異性試驗
            2.7 重復(fù)性試驗
            2.8 敏感性試驗
            2.9 與進口試劑盒數(shù)據(jù)比較
        3 實驗結(jié)果
            3.1 sGRA8-ELISA方法建立的結(jié)果
            3.2 ELISA陰、陽性判定標準的確定
            3.3 特異性試驗
            3.4 重復(fù)性試驗
            3.5 敏感性試驗
            3.6 與進口試劑盒數(shù)據(jù)比較
        4 討論
        參考文獻
全文總結(jié)
致謝
附錄


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]國外羊弓形蟲感染情況及影響因素研究進展[J]. 鄭斌,尹志奎,韓丁丁,亢彩彩.  中國病原生物學(xué)雜志. 2013(06)
[3]浦東新區(qū)犬貓弓形蟲病血清學(xué)調(diào)查分析[J]. 俞向前,文德亮,龔大弟,張忠海,龔俊文,孫福華,王衛(wèi)國,張巧英,葉承榮.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2013(02)
[4]雞弓形蟲病研究進展[J]. 龍祥,舒蘭,陳雪嬌,江濤.  長江大學(xué)學(xué)報(自科版). 2013(11)
[5]川渝兩地豬弓形體血清流行病學(xué)調(diào)查[J]. 翟少欽,付文貴,鄭華,付利芝.  中國獸醫(yī)雜志. 2013(02)
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博士論文
[1]四株不同動物來源弓形蟲感染小鼠和雞免疫病理變化的比較研究[D]. 趙光偉.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012

碩士論文
[1]荊州市雞弓形蟲病血清學(xué)調(diào)查[D]. 龍祥.長江大學(xué) 2013
[2]雞弓形蟲診斷抗原的篩選[D]. 李銳.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]我國部分地區(qū)雞、豬及幾種淡水生物弓形蟲感染情況調(diào)查[D]. 張夢.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]我國部分地區(qū)雞群弓形蟲感染情況調(diào)查[D]. 沈博.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號：3379651