旨在鑒定河南某蛋雞場以心包積液、肝腫大出血為特征的病原,并對病原的免疫原性蛋白進行表達和效果分析。本研究采用病毒分離、血清學試驗、PCR檢測及測序分析、動物回歸試驗、大腸桿菌表達、蛋白純化、攻毒保護等方法進行研究。結果顯示,所采集樣品經(jīng)卵黃囊途徑接種7日齡SPF雞胚,盲傳2代后獲得病毒;PCR可擴增出約900 bp的Hexon基因片段,經(jīng)測序,其Hexon基因與血清C4型毒株的相似性為100%;血清中和試驗結果表明分離的禽腺病毒為1群血清4型禽腺病毒,命名為HN-ZK株。該毒株可在雞胚原代肝細胞上產(chǎn)生CPE,病毒含量可達10^7.5TCID₅₀·0.1 mL^-1。動物回歸試驗表明,該分離毒株可使35日齡SPF雞100%（10/10）表現(xiàn)出發(fā)病癥狀。以分離株的DNA為模板,利用大腸桿菌原核表達系統(tǒng),獲得相對分子質量約為33 ku的Fiber-2蛋白,離心濃縮、純化后蛋白含量為300 mg·mL^-1。將表達的Fiber-2蛋白用不同的劑量免疫SPF雞,結果表明20μg·只^-1的劑量能... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學報. 2020,51(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

接毒雞胚的病理學特征分析

分離毒株PCR擴增出約900 bp的片段,與預期的目的片段大小相符,擴增片段電泳結果詳見圖2。利用1群禽腺病毒陽性血清對PCR鑒定為陽性的分離毒樣本進行血清型鑒定,結果表明分離毒為1群血清4型禽腺病毒,命名為HN-ZK株。2.1.3 Hexon基因測序及遺傳進化分析

分離毒株感染SPF雞后,從試驗雞的臨床表現(xiàn)、評分和死亡情況可知,3組 試驗雞均于感染后第2天開始發(fā)病,死亡期主要集中在感染后第3～7天,感染后第10天未死亡雞均恢復正常。感染雞的臨床癥狀統(tǒng)計分值與對照雞差異顯著(P<0.05,n=10),平均分值變化情況詳見圖4A。其中107TCID50組試驗雞于感染后第3天有7只死亡,第5天1只死亡;106TCID50組試驗雞于感染后第3天有3只死亡,第4天有2只死亡,第5天有1只死亡;105TCID50劑量組于感染后第4天有2只死亡,第5天有2只死亡,第7天1只死亡,至觀察期結束,107TCID50、106TCID50、105TCID50劑量組的存活率分別為2/10、4/10、5/10,詳見圖4B;病死雞剖檢發(fā)現(xiàn)心包積有淡黃色透明的滲出液;肝腫脹、邊緣鈍圓、質地變脆,色澤變黃,對照雞剖檢后,各臟器未見明顯異常,詳見圖4C～E。圖4 FAdV-4分離毒株（HN-ZK株）感染SPF雞發(fā)病情況的臨床指標


本文編號：3376189