旨在鑒定河南某蛋雞場(chǎng)以心包積液、肝腫大出血為特征的病原,并對(duì)病原的免疫原性蛋白進(jìn)行表達(dá)和效果分析。本研究采用病毒分離、血清學(xué)試驗(yàn)、PCR檢測(cè)及測(cè)序分析、動(dòng)物回歸試驗(yàn)、大腸桿菌表達(dá)、蛋白純化、攻毒保護(hù)等方法進(jìn)行研究。結(jié)果顯示,所采集樣品經(jīng)卵黃囊途徑接種7日齡SPF雞胚,盲傳2代后獲得病毒;PCR可擴(kuò)增出約900 bp的Hexon基因片段,經(jīng)測(cè)序,其Hexon基因與血清C4型毒株的相似性為100%;血清中和試驗(yàn)結(jié)果表明分離的禽腺病毒為1群血清4型禽腺病毒,命名為HN-ZK株。該毒株可在雞胚原代肝細(xì)胞上產(chǎn)生CPE,病毒含量可達(dá)10^7.5TCID₅₀·0.1 mL^-1。動(dòng)物回歸試驗(yàn)表明,該分離毒株可使35日齡SPF雞100%（10/10）表現(xiàn)出發(fā)病癥狀。以分離株的DNA為模板,利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng),獲得相對(duì)分子質(zhì)量約為33 ku的Fiber-2蛋白,離心濃縮、純化后蛋白含量為300 mg·mL^-1。將表達(dá)的Fiber-2蛋白用不同的劑量免疫SPF雞,結(jié)果表明20μg·只^-1的劑量能... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,51(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

接毒雞胚的病理學(xué)特征分析

分離毒株P(guān)CR擴(kuò)增出約900 bp的片段,與預(yù)期的目的片段大小相符,擴(kuò)增片段電泳結(jié)果詳見圖2。利用1群禽腺病毒陽性血清對(duì)PCR鑒定為陽性的分離毒樣本進(jìn)行血清型鑒定,結(jié)果表明分離毒為1群血清4型禽腺病毒,命名為HN-ZK株。2.1.3 Hexon基因測(cè)序及遺傳進(jìn)化分析

分離毒株感染SPF雞后,從試驗(yàn)雞的臨床表現(xiàn)、評(píng)分和死亡情況可知,3組 試驗(yàn)雞均于感染后第2天開始發(fā)病,死亡期主要集中在感染后第3～7天,感染后第10天未死亡雞均恢復(fù)正常。感染雞的臨床癥狀統(tǒng)計(jì)分值與對(duì)照雞差異顯著(P<0.05,n=10),平均分值變化情況詳見圖4A。其中107TCID50組試驗(yàn)雞于感染后第3天有7只死亡,第5天1只死亡;106TCID50組試驗(yàn)雞于感染后第3天有3只死亡,第4天有2只死亡,第5天有1只死亡;105TCID50劑量組于感染后第4天有2只死亡,第5天有2只死亡,第7天1只死亡,至觀察期結(jié)束,107TCID50、106TCID50、105TCID50劑量組的存活率分別為2/10、4/10、5/10,詳見圖4B;病死雞剖檢發(fā)現(xiàn)心包積有淡黃色透明的滲出液;肝腫脹、邊緣鈍圓、質(zhì)地變脆,色澤變黃,對(duì)照雞剖檢后,各臟器未見明顯異常,詳見圖4C～E。圖4 FAdV-4分離毒株（HN-ZK株）感染SPF雞發(fā)病情況的臨床指標(biāo)


本文編號(hào)：3376189