豬瘟病毒（Classical swine fever virus, CSFV）是豬瘟（Classical swine fever, CSF）的病原,豬瘟對養(yǎng)豬業(yè)的危害巨大,常造成重大經(jīng)濟(jì)損失,也是我國計劃要消滅的重大動物疫病之一。目前,對豬瘟疫情的防控主要是通過疫苗接種和對感染豬瘟病毒的豬進(jìn)行嚴(yán)格撲殺和對周邊地區(qū)進(jìn)行消毒防疫。我國在國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）中將豬瘟列入優(yōu)先防治的6種動物疫病之一,并計劃進(jìn)一步擴(kuò)大豬瘟凈化區(qū)域。為了快速檢測CSFV抗體效價,判斷疫苗免疫狀況,建立針對CSFV特異性抑制劑的高通量篩選方法。本研究利用反向遺傳學(xué)技術(shù)拯救了一株能夠穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase, Flue）基因的豬瘟報告病毒CSFV-Npro Fluc通過重疊PCR的方法將Fhuc基因克隆到基于RNA聚合酶Ⅱ的Shimen株全長感染性cDNA克隆pBRCISM的Npro編碼區(qū)內(nèi)。經(jīng)RT-PCR、抗原捕獲ELISA、間接免疫熒光試驗（IFA）和實(shí)時熒光定量PCR （real-time-PCR）檢測顯示病毒構(gòu)建成功。測定病毒生長曲線后發(fā)現(xiàn)該報告... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CSFV基因組結(jié)構(gòu)示意圖（引自Murrayetal.，2008)

CSFV的生命周期（引自Murrayetal.，2008)

全長cDNA感染性克隆pBRCISM-NP『°Fluc的構(gòu)建策略


本文編號：3375870