豬瘟病毒（Classical swine fever virus, CSFV）是豬瘟（Classical swine fever, CSF）的病原,豬瘟對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的危害巨大,常造成重大經(jīng)濟(jì)損失,也是我國(guó)計(jì)劃要消滅的重大動(dòng)物疫病之一。目前,對(duì)豬瘟疫情的防控主要是通過疫苗接種和對(duì)感染豬瘟病毒的豬進(jìn)行嚴(yán)格撲殺和對(duì)周邊地區(qū)進(jìn)行消毒防疫。我國(guó)在國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）中將豬瘟列入優(yōu)先防治的6種動(dòng)物疫病之一,并計(jì)劃進(jìn)一步擴(kuò)大豬瘟凈化區(qū)域。為了快速檢測(cè)CSFV抗體效價(jià),判斷疫苗免疫狀況,建立針對(duì)CSFV特異性抑制劑的高通量篩選方法。本研究利用反向遺傳學(xué)技術(shù)拯救了一株能夠穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase, Flue）基因的豬瘟報(bào)告病毒CSFV-Npro Fluc通過重疊PCR的方法將Fhuc基因克隆到基于RNA聚合酶Ⅱ的Shimen株全長(zhǎng)感染性cDNA克隆pBRCISM的Npro編碼區(qū)內(nèi)。經(jīng)RT-PCR、抗原捕獲ELISA、間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）和實(shí)時(shí)熒光定量PCR （real-time-PCR）檢測(cè)顯示病毒構(gòu)建成功。測(cè)定病毒生長(zhǎng)曲線后發(fā)現(xiàn)該報(bào)告... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CSFV基因組結(jié)構(gòu)示意圖（引自Murrayetal.，2008)

CSFV的生命周期（引自Murrayetal.，2008)

全長(zhǎng)cDNA感染性克隆pBRCISM-NP『°Fluc的構(gòu)建策略


本文編號(hào)：3375870