豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV）引起的以妊娠母豬繁殖障礙、小豬呼吸道癥狀為主要特征的嚴(yán)重豬傳染疾病。高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（HP-PRRSV）于2006年首次在中國(guó)發(fā)現(xiàn),以高熱、高致病性、高死亡率為典型特征。已有的研究證明前列腺素E2（Prostaglandin E2, PGE2）是導(dǎo)致發(fā)熱的關(guān)鍵因子,且環(huán)氧合酶1/2（COX-1/2）介導(dǎo)的酶促反應(yīng)是PGE2合成過程中的關(guān)鍵限速步驟。但是HP-PRRSV引起高熱背后的機(jī)制以及COX和PGE2在其中的作用目前仍不清楚。在本研究中,首先發(fā)現(xiàn)豬的死亡時(shí)間同小豬感染后期體溫之間有明顯的相關(guān)性,即感染后期體溫越高的小豬死亡的時(shí)間也越早。并且HP-PRRSV顯著增強(qiáng)感染小豬血清和肺泡灌洗液及感染PAMs（豬肺泡巨噬細(xì)胞）中PGE2的分泌。然后通過real-time PCR、western blot等方法我們發(fā)現(xiàn)PRRSV能夠顯著上調(diào)PAMs中COX-1的mRNA和蛋白水平。較COX-2的特異性抑制劑來說,CO... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 引言
    1.1 豬繁殖與呼吸綜合征概述
        1.1.1 歷史與分布
        1.1.2 臨床癥狀
    1.2 豬繁殖與呼吸綜合征病毒概述
        1.2.1 病原
        1.2.2 分子生物學(xué)特征
        1.2.3 PRRSV的感染靶細(xì)胞與機(jī)制
    1.3 PRRSV的流行病學(xué)特征
        1.3.1 感染率高
        1.3.2 易感動(dòng)物
        1.3.3 傳播與防治
    1.4 高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒
    1.5 發(fā)熱
        1.5.1 致熱原和激活物的概念
        1.5.2 致熱源作用部位
        1.5.3 致熱原的作用方式
    1.6 前列腺素E_2
        1.6.1 PGE_2概述
        1.6.2 PGE_2合成
        1.6.3 PGE_2和發(fā)熱
    1.7 MAPK信號(hào)通路
        1.7.1 MAPK
        1.7.2 ERK1/2
        1.7.3 p38 MAPK
    1.8 Protein kinase C
    1.9 CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBP-β
        1.9.1 C/EBP
        1.9.2 C/EBP-β
    1.10 研究目的及意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和研究方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 儀器
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 菌種及質(zhì)粒
        2.1.5 病毒和細(xì)胞
        2.1.6 細(xì)胞培養(yǎng)和病毒感染
        2.1.7 病毒TCID50的檢測(cè)方法
        2.1.8 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 繁毒
        2.2.2 病毒紫外滅活
        2.2.3 攻毒以及體溫檢測(cè)
        2.2.4 BALF(Bronchoalveolar lavage fluid)和血清的獲取
        2.2.5 原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及原核表達(dá)
        2.2.6 多克隆抗體制備
        2.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PAMs胞內(nèi)COX-1/2蛋白表達(dá)情況
        2.2.8 實(shí)時(shí)定量PCR
        2.2.9 信號(hào)通路抑制試驗(yàn)
        2.2.10 Western blot實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 COX-1啟動(dòng)子和突變質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.12 質(zhì)粒小量提取
        2.2.13 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
        2.2.14 雙熒光素酶報(bào)告檢測(cè)試驗(yàn)
        2.2.15 siRNA試驗(yàn)
        2.2.16 激光共聚焦
        2.2.17 ELISA檢測(cè)PGE_2量
        2.2.18 細(xì)胞組分核質(zhì)分離
        2.2.19 染色質(zhì)免疫共沉淀試驗(yàn)(ChIP)
        2.2.20 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第三章 PRRSV通過ERK1/2-C/EBP-β通路上調(diào)COX-1從而導(dǎo)致PGE_2上升
    3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.1.1 HP-PRRSV感染能夠上調(diào)PGE_2水平
        3.1.2 PRRSV感染PAMs上調(diào)COX-1的mRNA水平
        3.1.3 COX-1多克隆抗體的制備
        3.1.4 PRRSV感染PAMs能夠上調(diào)COX-1蛋白水平的表達(dá)
        3.1.5 HP-PRRSV能夠通過上調(diào)COX-1引起PGE_2表達(dá)升高
        3.1.6 PRRSV通過MEK-ERK1/2信號(hào)通路誘導(dǎo)COX-1表達(dá)
        3.1.7 豬COX-1啟動(dòng)子的克隆和序列分析
        3.1.8 HP-PRRSV通過誘導(dǎo)C/EBP-β磷酸化來激活COX-1表達(dá)
    3.2 討論
        3.2.1 HP-PRRSV導(dǎo)致致熱源PGE_2的分泌增加
        3.2.2 HP-PRRSV上調(diào)COX-1而不是COX-2并促進(jìn)PGE_2的分泌
        3.2.3 HP-PRRSV通過ERK1/2-p-C/EBP-β途徑激活COX-1
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]The Interferon Signaling Network and Transcription Factor C/EBP-β[J]. Padmaja Gade,Dhan V.Kalvakolanu.  Cellular & Molecular Immunology. 2007(06)



本文編號(hào)：3375443