牛傳染性鼻氣管炎是危害全球養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展的一種急性傳染病,病原為牛傳染性鼻氣管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV）。IBRV感染牛體后,主要引起嚴重的呼吸道疾病、母牛的流產(chǎn)及其他神經(jīng)性系統(tǒng)疾病。潛伏感染的特性給該病的防治及凈化造成了極大困難。目前主要通過疫苗接種來防控此病。IBRV疫苗主要有滅活疫苗、弱毒疫苗、DNA疫苗、亞單位疫苗、基因缺失疫苗及活載體疫苗,但在一些方面仍存在諸多缺陷。因此,研發(fā)更有效的疫苗是防控IBR中最重要的問題。與傳統(tǒng)的基因工程亞單位疫苗相比,多表位疫苗可克服MHC類分子的限制使其得到高效提呈,且能有效應(yīng)對病原微生物的變異等,具有很好的應(yīng)用前景。本研究首先將已鑒定出的IBRV的gB、gC和gD相關(guān)抗原表位及破傷風(fēng)毒素通用T細胞表位P2以GGGGS或AAYAAY為接頭進行串聯(lián)連接,用DNASTAR Protean軟件分析其抗原性以選擇最佳連接組合,化學(xué)合成嵌合蛋白基因序列。構(gòu)建pET-28a-P2-gB/gC/gD重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化至E.coli BL21（DE3）感受態(tài)細胞表達重組蛋白。純化后的重組蛋白與IS... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

多表位串聯(lián)序列抗原性分析結(jié)果

粒的鑒定 重組載體經(jīng) Nhe I 和的目的片段及約 520測序，測序結(jié)果與Mbp1 2蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)S)； B：P2-gB/gC/gombinant protein predictGGS); B: P2-gB/gC/gD

2.3.2 pET-28a-P2-gB/gC/gD 重組質(zhì)粒的鑒定構(gòu)建的 pET-28a-P2-gB/gC/gD 重組載體經(jīng) Nhe I 和 Hind III 雙酶切后，進行 1%瓊電泳分別可見 1125 bp 和 1173 bp 的目的片段及約 5200 bp 的載體條帶，見圖 2-4。將正確的質(zhì)粒送至北京華大基因公司測序，測序結(jié)果與目的片段序列完全一致。Mbp7000―1 24000―2000―1000―圖 2-3 重組蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果A：P2-gB/gC/gD(GGGGS)； B：P2-gB/gC/gD(AAYAAY)；Fig.2-3 Tertiary structure of recombinant protein predicted by SWISS MODELA: P2-gB/gC/gD(GGGGS); B: P2-gB/gC/gD(AAYAAY)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]BVDV/IBRV主要抗原表位E2/gD基因串聯(lián)表達及免疫原性[J]. 侯亞蘭,侯佩莉,李杰,王洪梅,何洪彬.  吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2014(01)
[2]牛傳染性鼻氣管炎病毒LNM株致弱疫苗免疫效力的研究[J]. 郭利,冷雪,張淑琴,苗立光,趙炳武,武華.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2011(02)
[3]SDS-PAGE 法測定His-tag 融合蛋白分子量產(chǎn)生偏差的原因[J]. 唐威華,張景六,王宗陽,洪孟民.  植物生理學(xué)報. 2000(01)

碩士論文
[1]牛傳染性鼻氣管炎病毒糖蛋白gD單抗制備及其抗原表位鑒定與雙抗夾心ELISA的建立[D]. 周躍輝.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2015
[2]牛傳染性鼻氣管炎TK/gE基因缺失重組病毒的研究[D]. 定明.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號：3371588